Esta es una revista con un enfoque científico que te adentrará al maravilloso mundo de la bacteriología con un amplio contenido de imágenes y textos interesantes.

TODO CEREBROS

TODO CEREBROS

BACTERIOPOLIS

 

Enfermedades infecciosas y Bacteriología Clínica

Denia Castro - Goretti González

 

Esta revista tiene como fin el adentrar a nuestros lectores al maravilloso mundo de la Bacteriología, donde mediante imagenes, información y experimentos iremos explorando esta ciencia. Los experimentos aquí englobados se hacen con la finalidad de dar a conocer como es que las bacterias estan relacionadas con todo nuestro entorno, y la importancía de  conocer como es que establecen una relación con los seres vivos en todo el mundo, acompañanos en este viaje, y recuerda que sin ciencia no hay futuro. 

Introducción

METODOLOGÍA

 

1.- Obtener muestra por micción espontánea. Es ideal la primera orina de la mañana. La muestra se recoge después de limpiar los genitales con agua y jabón.

2.- Se descarta la primera porción de orina y se recoge de 5-15ml del volúmen restante.

3.- Es importante anotar los datos personales y de la historía clínica del paciente, pues son fundamentales para el adecuado procesamiento y análisis de las muestras en las que se requiere estudio microbiológico. 

4.- Realizar el urocultivo de la muestra en Medio sangre y MedioCLED a 35-37 ºC 24 h.

5.- Observar morfología colonial, recuento de UFC/ml. Tinción de Gram.

6.- Realizar las pruebas bioquímicas de Catalasa y Oxidasa e identificar al microorganismo.

 

OBJETIVOS

1) Realizar la técnica de urocultivo para observar que agente etilógico se desarrolla en la muestra.

2) Establecer el número de UFC/ml de la muestra para determinar si es positiva.

3) Observar el cultivo de la muestra problema macroscopicamente y microscopicamente.

4) En base a las pruebas bioquímica establecer un posible agente estiológico para la muestra ensayada

El urocultivo es, una prueba de análisis de laboratorio que tiene como finalidad detectar la presencia de microorganismos infecciosos en orina, para diagnosticar infección sintomática del tracto urinario ó infección asintomática  en pacientes con riesgo de infección. La piuria, junto con la bacteriuria, es un dato muy importante para el diagnóstico de infección del tracto urinario, ya que esta presente en practicamente todas las infecciones urinarias. Una excepción es la bacteriuria asintomática en la que la piuria puede estar ausente.

Urocultivo

Catalasa positivo se observa con desprendimiento de burbujas al agregar peróxido de hidrógeno. Indica la presencia de la enzima catalasa, útil para evitar los radicales tóxicos de la mieloperoxidasa de las células fagocíticas.

Resultados 

Morfología Macroscopica/Colonial

 

Color: Blanco

Forma: Circular

Consistencia: Cremosa

Tamaño: 2mm

Hemolisis: alpha-hemolisis

Pruebas Bioquímicas

Catalasa positiva

Oxidasa negativa

Coagulasa positiva

Coagulasa positiva, se forma una coagulo en plasma al agregar bacterias a este. Esta enzima estimula la conversion de fibrinogeno a  fibrina insoluble, donde se agran en grupos.

Cocos en racimo Gram positivo, 100X

Posible Agente Etiológico:

 

Staphylococcus aureus

 

 

Unidades Formadoras de Colonias

 

3 UFC/ml

Morfología Microscópica

Tinción Gram

 

Cocos Gram positivos

 

 

 

Micrografía electrónica de barrido. Numerosos cúmulos de bacterias S. aureus. 9560x.

Imagen cortesía de CDC/ Janice Haney Carr/ Jeff Hageman, M.H.S.

Conclusiones

 

Con los resultados obtenidos de las pruebas realizadas se cree que el agente etiológico encontrado en la muestra es S. aureus, no obstante las UFCs contadas nos indican que es negativo a infección ya que hubo menos de 10,000 UFCs por lo que se le puede considerar como contaminante de la muestra durante la micción,  ya que  S. aureus forma parte de la microbiota normal en el humano.  

 

 

Bibliografía

 

  • Prescott, L.M.,  Harley J.P. y Klein D.A. Microbiología 4a edición, Mc Graw Hill, Interamericana 1999.
  • Diaz, R. Gamazo, Manual práctico de Microbiología, 2ª edición , Aguilar Madrid, 1990.
  • Calderón-Jaimes, Ernesto, et al. Diagnóstico y tratamiento de las infecciones en vías urinarias: un enfoque multidisciplinario para casos no complicados. Bol Med Hosp. Infantil de Mex. 70.1 (2013): 3-10.
  • Montoya Villafañe. 2008.  Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2a edición. Universidad de Antioquia.

 

 

 

Créditos: Castro P. Denia, González F. María G. 

 

 

 

 

ANÁLISIS DE RESULTADOS

El criterio que aplicamos para evaluar la presencia de bacterias Gram positivas en la orina fue el de Kass(1957) y Sanford (1956), que considera que las bacterias provenientes de la vejiga o de las porciones superiores del aparato urinario utilizan la orina como medio de cultivo alcanzando una población superior a 100,000 UFC por ml de muestra. En la muestra ensayada se contaron unicamente 3 UFC/ml por lo tanto al compararlo con el valor de referencia se determina que no es una infección y probablemente el agente etiológico encontrado fue arrastrado durante la micción por tanto se le puede considerar como contaminante ya que autores proponen que cuentas menores a 10,000 UFC/ml se toman de esa forma. Empleando la técnica de Gram como tinción para identificación con el objetivo de inmersión no se observaron leucocitos en la orina ya que al ser menos de 10,000 UFC/ml el frote no revela ese tipo de datos y solo nos sirvio para identificar a un Staphylococcus Gram positivo. Se emplearon pruebas bioquímicas y  la morfología colonial para determinar la especie. La catalasa fue positiva y la oxidasa negativa, las colonias presentaron un color blanco con una consistencia cremosa, comparando esto con la bibliografía nos encontramos con que el probable agente etiologico es S. aureus bacteria Gram positiva que se caracteriza por ser productora de catalasa. Los seres humanos son un reservorio natural de S. aureus considerado como parte de la microbiota normal que puede encontrarse en las narinas anteriores (fosas nasales),  un 15% de las mujeres son portadoras de cepas de S.aureus.

El cultivo endocervical, del endocérvix, vaginal,  o cultivo del cuello uterino es un análisis de laboratorio que se emplea para diagnosticar la posible  presencia de una infección en el aparato genital femenino.

 

Suele realizarse cuando existen síntomas  como dolor pélvico, inflamación de la vagina, exceso de flujo inusual u otros signos de infección, que puede ser causados por una ITS.(1)

La microbiota vaginal muestra un alto grado de complejidad: más de 30 géneros y 70 especies se detectan en mujeres en edad fértil, con predominio de Lactobacillus spp. con (hasta 18 especies diferentes.(2) En menor proporción se presenta una gran variedad de especies correspondientes a géneros muy diversos; se trata en su mayoría de microorgnismos anaerobios. (3)

 

La vaginosis bacteriana (VB) es un proceso patológico que afecta la vagina y se considera un síndrome por alteraciones de la microbiota bacteriana que se traduce en cambios fisicoquímicos de las secreciones vaginales y en el que intervienen las características propias del hospedero. (4)

CULTIVO

ENDOCERVICAL

Saber cúando se altera el equilibrio de esta microbiota colonizante, busqueda de agentes exógenos, transmistidos normalmente por vÍa sexual y la detección de portadoras de determinados microorganismos. La mayoria de las situaciones clínicas que pueden ser objeto de estudios microbiológicos para el aislamiento o visualización del agente etiológico son:

 

  1. 1. Vulvovaginitis: cuyo agente etiológico es Candida spp principalmente Candida albicans.
  2. 2. Vaginosis: cuyo agente etiológico puede ser la ausencia o disminución de Lactobacillus spp y abundante microbiota mixta compuesta por Gardnerella vaginalis
  3. 3. Infección gonocócica: para identificar el agente etiológico de esta infección no es recomendable la muestra de exudado vaginal si no endocervical.

La mucosa vaginal tiene una microbiota normal,  cuyo conocimiento y consideración debe tenerse en cuenta a la hora del estudio microbiológico de infecciones vaginales.

Se pueden considerar tres situaciones:

 

OBJETIVOS  

  • 1.- Realizar el cultivo de la muestra problema en los medio de elección.
  • 2.- Derterminar mediante la tinción de Gram si el agente etiológico estudiado es negativo o positivo.
  • 3.- Mediante la observación macroscopica y microscopica identificar las características principales de la colonia aislada.
  • 4.-  Identificar mediante pruebas bioquímicas y un antibiograma el  posible agente etiológico se puede encontrar en la muestra de exudado vaginal. 

METODOLOGÍA

 

1.- Las muestra de exudado vaginal deben conservarse en un medio de transporte Cary blair a temperatura de 35° o en refrigeración.

2.- Tomar el hisopo del medio de transporte y colocar la muestra en un punto del medio, girando el hisopo. Realizar el aislamiento mediante estrías cruzadas en los medios de elección empezando desde el medio más nutritivo al medio más  selectivo.

Nota. los medios empleados fueron :

Gelosa sangre, Gelosa chocolote, MacConkey y biggy.

3.- Los medios ya sembrados se dejan en la estufa a 37 C por 24 h.

4.- Después de 24 h se realiza la observación macroscópica de las colonias así como la tinción de Gram para determinar la mofología  microscópica.

5.- Realizar las pruebas bioquímicas básicas Catalasa y Oxidasa, dependiendo el resultado se determinara que otra biquímica se utilizará.

6.- Realizar un prueba de sensibilidad para determinar la resistencia a antibioticos.

En esta imagen se observa  de Candida albicans produciendo verdaderos tubos germinales, una extensión filamentosa de la levadura, que se  obtuvo en la prueba de tubo germinativo.

Esto nos permite identificar el agente etiológico como C. albicans.

 

Para considerar una prueba como positiva deben observarse más de 5 tubos germinales.

Morfología

Macroscópica/Colonial

 

Color: Crema nacarado

Forma: Circular

Consistencia: Cremosa

Tamaño: 2 mm

 

Pruebas Bioquímicas

Catalasa positiva

Oxidasa negativa

Tubo germinativo positivo

PRUEBA DE FORMACIÓN

TUVO GERMINATIVO

Placa donde se sembro la muestra 1, Biggy.

RESULTADOS

MUESTRA 1

Agente Etiológico:

 

Candida albicans

 

 

Morfología Microscópica

Tinción de Gram

 

Levaduras Gram positivos

 

Levadura Gram postivo, 100 x.

Micrografía electrónica de barrido. C. albicans, 9560x.
Imágen cortesía de: hongosgenitalesinfo.com

Morfología 

Macroscopica/ Colonial

 

Color: Amarillo blanquecino

Forma: Circular

Conistencia: Cremosa

Tamaño: 1- 2 mm

Hemólisis: beta-hemólisis

Metabolismo Microbiano

Catalasa positiva

Oxidasa negativa

Coagulasa positivo

Resistencia: Bacitracina (R). Sensibilidad: Novobicina (S).

PRUEBA DE COAGULASA

En esta imagen se observa la formación de un coagulo al inocular e incubar el microorganismo  (S. aureus). 

RESULTADOS

MUESTRA 2

Agente Etiológico:

 

Staphylococcus aureus

 

 

PRUEBA DE SENSIBILIDAD

Sensidicos

Placa de GS con sensidicos donde se observa la resistencia de la bacteria frente al antibiótico bacitracina, y sensibilidad ante Novobiocina.

 S. aureus en racmos,  muestras de alimentos. 9560x. Imagen cortesía de CDC by Melissa Brower.

Morfología Microscópica

Tinción de Gram

 

Cocos Gram positivos

 

Cocos en racimos Gram positivo, 100x 

 Análisis de Resultados

Mediantes las pruebas realizadas y los resultados obtenidos llegamos a identificar a los dos agentes etiológicos presentes en las muestras de exudado vaginal ensayadas, los cuales son: Candida albicans y Staphylocccus aureus . Se esperaba encontrar alguna de las bacterias en las muestras ya que la mayorua de la población del sexo femenino muestra infecciones vaginales por alguno de estos microorganismos. En el caso de Candida  albicans fue fácil lograr su detección en la muestra ya que las caracteristicas morfologicas presentabas en el apartado del color un color caracteristico de esta levadura, además de que el olor del medio de cultivo era un ligero olor a cerveza. En la morfología microscopica observamos levaduras Gram positivo gemando lo cual nos dio como resultado que efectivamente se trataba de Candida albicans y que no formaba parte de la microbiota normal de la paciente ya que había una gran cantidad de UFC/ml en la placa donde se sembro. Finalmente observamos el  falso miscelio utilizando la prueba de tubo germinativo como prueba para confirmativa de  Candida albicans como agente etilógico en esta muestra procesada.

En la segunda muestra procesada en la Tinción de Gram obtuvimos cocos en  racimo Gram positivo.  En las pruebas bioqímicas básicas de catalasa y oxidasa,  catalasa dio positivo, oxidasa negativo; en la prueba específica de coagulasa está salió positivo y como prueba complementaria un Antibiograma con sensidiscos para medir la resistencia de la bacteria frente  a antibioticos como la Bacitracina y la Novobiocina,  de las cuales la UFC resultó sensible a novobiocina y resistente a Bacitracina, lo que nos pérmite identificarlo como Staphylocccus aureus .

Aislamos y logramos Identificar a los dos posibles agente etiológicos de las muestras procesadas, que  Candida albicans y Staphylococcus aureus con base en las pruebas  realizadas.  La mayoria de las mujeres presentan estas dos microorganismos como parte de la microbiota normal, no obstante,  estos microorganismos pueden  volverse patogenos si el número de colonias aumentan.

 

 

Conclusiones 

 

 

BIBLIOGRAFÍA

 

(1). Cultivo ginecológico. Clínica Askabide. España, 2014. Disponible en: http://www.askabide.com/servicios-medicos/ginecologo-en-guipuzcoa/pruebas-ginecologicas/cultivo-vaginal.php. Consultado el 8 de Octubre del 2016.

 

(2). BOLOGNO, Romina et al. Importancia del estudio del balance del contenido vaginal (BACOVA) en el control preventivo de las trabajadoras sexuales. Rev. argent. microbiol. [online]. 2011, vol.43, n.4 [citado  2016-10-08], pp. 246-250 . Disponible en: <http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412011000400002&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0325-7541.

 

(3). Fredricks DN, Fiedler TL, Marrazzo JM. Molecular identi- Molecular identifcation or bacteria associated with bacterial vaginosis. N Engl J Med 2005; 353: 1899-911.

 

(4).  Raquel I. Caballero Pozo, Dr. Ricardo Batista Moliner, et. al. Vaginosis bacteriana. RESUMED 2000;13(2):63-75. Dsipinible en: http://www.bvs.sld.cu/revistas/res/vol13_2_00/res04200.htm. Consultado el: 8 de Octubre del 2016.

 

 

 

Créditos

 

Castro P. Denia

 

González F. Goretti

      

La porción inferior del intestino tiene una flora bacteriana normal excesivamente amplia. Los microorganismos con mayor prevalencia son los anaerobios ( Bacteroides, bácilos gram positivos, Estreptococos), microorganismos entéricos gran negativos y Enterococcus faecalis. Cualquier intento por aislar bacterias patógenas de las heces implica la separación de las especies patógenas, usualmente a través del empleo de medios selectivos diferenciales y de cultivos enriquecidos. Las principales causas de trastornos gastrointestinales agudos incluyen a los virus, las toxinas (de: EstafilococosVibrionesEscherichia coli ), bacilos entéricos gran negativos invasores, los fermentadores lentos de la lactosa, la Shigella, la Salmonella y la Campilobacterias. La importancia relativa de estos grupos tiene grandes discrepancias en las distintas partes del mundo.


Las heces y los raspados rectales son los especimenes de que se dispone con mayor facilidad. Debe anotarse, en el examen macrocópico la presencia de sangre, moco o helmintos en la inspección inicial. Se suspenden los especímenes en un caldo selectivo como el Caldo de Tetrationato y se cultivan sobre medios ordinarios así como en medios selectivos diferenciales, por ejemplo Agar EMB, Agar McConkey, Agar S-S, para permitir la separación de los bacilos gran negativos que no fermentan la lactosa de otras bacterias entéricas comunes.


Los frotis teñidos pueden revelar una prevalencia de leucocitos y de ciertos microorganismos anormales como Cándida o estafilococos, pero no pueden utilizarse para diferenciar las bacterias entéricas patógenas de las de la flora normal, por lo que deben realizarse otro tipo de pruebas para discriminar los tipos de bacterias presentes en la muestra como son las pruebas bioquímicas.

COPROCULTIVO

 1.- Obtener una muestra de materia fecal que no tenga más de 2 horas de haber sido tomada.

 

2.- La muestra debe conservarse en un medio de transporte Cary Blair (medio recomendado para la recolección, transporte y conservación de muestra de heces). Se deja a temperatura ambiente. 

 

3.- El hisopo con muestra fecal  se saca del medio de transporte para colocarlo en Caldo tetrationato, se  agregan 4 a 5 gotas de Lugol, y se incuba por 24 horas a 37º C .

 

4.-Posteriomente sembrar en Verde Brillante o en caso de no contar con el medio anterior se puede sembrar en MacConkey, incubar a 37º C/ 24h. 

 

5.- Con otro hisopo tomar muestra del medio Cary Blair, sembrar en medios de cultivo selectivos. SS, Mackonkey y EMB; realizar estria cruzada e incubar a 37ºC/24 h.
Nota: Sembrar desde el medió más nutritivo al más diferencial.

 

6.- Observar  si se obtuvieron UFC´s y las  caracteristicas morfologicas macroscópicas.

 

7.- Realizar tinción de Gram y observar al microscopio para identificar la morfología microscópica de las colonias aisaladas.

 

8.- Realizar las pruebas Bioquímicas de Catalasa y Oxidasa.

 

9.- Determinar el posible agente etiológico mediante pruebas Bioquímicas especificas: LIA, TSI, MIO y Citrato de Simmons.

 

 

 

OBJETIVOS 

 

1.- Clasificar la morfología colonial de las bacterias encontradas.

 

2.- Observar macroscopicamente y microscopicamente las colonias aisladas.

 

3.- Mediante pruebas bioquímicas identificar de que agente etiológico se trata.

 

4.- Determinar si las bacterias pertenecen a la microbiota del paciente o forman parte de una posible infección. 

 

5.- Comparar los resultados con la bibliografía consultada. 

METODOLOGÍA

A. Medio SS, crecimiento de colonias rosadas, fermentación de lactosa. B. Medio EMB, crecimiento de colonias verde metálico, fermentación rápida de lactosa.

Metabolismo Microbiano

Catalasa positivo

Oxidasa negativo

 

Pruebas Bioquímicas

TSI: A/A Fermentación de  glucosa, lactosa y sacarosa.

LIA: Descarboxilasa lisina (-). Desaminación de lisina(-).

MIO: Movilitad (+), Indol (-) y Ornitina descarboxilasa(+).

Citrato de Simmons: Positivo.

 

Morfología

Macroscópica/Colonial

 

Medio SS

Color: Rosa

Forma: Circular

Consistencia: Cremosa

Tamaño: 2 mm

 

Medio MacConkey

 

 

Color: Rosa transparente

 

Forma: Irregular

 

Consistencia: Cremosa

 

Tamaño: 2 mm

 

 

Medio EMB

 

 

Color: Verde metalico

 

Forma: Fusiforme

 

Consistencia: Seca

 

Tamaño: 2 mm

 

 

 

   A        B         C

   A             B        

RESULTADOS

Bioquímicas para bacilos gram negativos

(A) TSI, Observece que el color es amarillo en todo el tubo, (A/A) indicativo de que la bacteria fermenta los carhbohidratos presentes en el medio, sin presencia de gas o producción de ácido sulfhídrico.

 

(B) MIO, observece la presencia de turbides indicativo de que la bacteria tiene movilidad;

descarboxilasa ornitina positivo

 

(C) Citrato Simmons, El medio viro de verde a azul, indicativo de que la bacteria utiliza citrato como fuente de energía.

 

Agente Etiológico:

 

Citrobacter freundii

 

 

Micrografía electrónica de barrido.  S. aureus, 9560x. Imágen cortesía de CDC by Melissa Brower.

Morfología Microscópica

Tinción de Gram

 

Bacilos Gram negativos

 

Bacilos aislados Gram negativos, 100x 

 

Los resultados obtenidos mediante las pruebas Bioquímicas nos llevaron a identificar a Citrobacter freundii como  el agente etiológico 

C. freundii es un bacilo Gram negativo, móvil ,anaerobio facultativo perteneciente a las enterobacterias. Los miembros del género Citrobacter se denominan así por su capacidad para emplear citrato como única fuente de carbono.

Se diferencian  por su rápida capacidad de fermentar la lactosa, que queda evidenciado en el medio EMB con el característico color verde metálico de las colonias;  además alguna cepas son productoras de ácido sulfhídrico pero  no es el caso de la cepa aislada.

 

La infección causada por C. freundii no es común, sin embargo, si el paciente se encuentra inmunocomprometido puede llegar a causarle una infección.

En el caso de la muestra procesada,  pertenecia a un paciente que presentaba  un cuadro clinico de diarrea, fiebre, convulsiones, decaimiento, ictericia, distensión abdominal, etc C. freundii lleva a cabo un mecanismo de adherencia y eliminacion en ele epitelio intestinal, es produce lesiones características debido a que elimina las microbellocilades de los enterocitos; esta patogenia ocasiona los sintomas ya mencionados. 

 

 

Los resultados de las bioquímicas y el historial clínico del paciente nos permite diagnosticar una infección por Citrobacter freundii, estó nos dice que  el paciente se encuentra suceptible, es decir, que este inmunocomprometido y que al consumir algún alimento contaminado como ensaladas no desinfectadas le provoco una invasion de Citrobacter freundii, que le ocasiono un cambio de la microbiota normal de su  sistema digestivo desarrollando los sintomas mencionados.

 

BIBLIOGRAFIA

 

Vogel Laurence C., Firguson Laurence, Gotoff Samuel "Citrobacter infections of the central nervaus system in early infancy" The Journal of Pediatrics July 1978 (86-88)

 

Southern Paul M., M.D. Jr. and Bagby Mary K.,B.S. Antimicrobial susceptibility pattems (antibiograms) as an aid in differentiating Citrobacter species". AjCP February 1977.

 

Enfermedades infecciosas. Principios y Práctica. Mandell GL, Dolin R, Bennett J, editores. 6.a ed. Madrid: Elsevier Churchill Livingstone; 2006 

 

 

 

 

CREDITOS

 

 Castro P. Denia

González F. Goretti

 

 

 

 

Analisis de Resultados

CONCLUSIONES

 

El exudado faríngeo es una prueba de laboratorio que se hace para aislar e identificar organismos que puedan causar una infección en la garganta. El diagnóstico de laboratorio correcto y oportuno depende del cuidado con que se realice la toma y manejo de la muestra siguiendo a detalle las instrucciones al respecto. La interpretación del resultado del laboratorio debe estar apoyado por un buen diagnóstico clínico y los antecedentes epidemiológicos del caso. La muestra para aislamiento de agentes infecciosos debe ser tomada ANTES de instaurar la terapia con antimicrobianos. La muestra debe identificarse incluyendo todos los datos relevantes del caso: nombre completo o clave, diagnóstico presuntivo, fecha de toma y tipo de muestra.

 

Para tomar la muestra se recomienda no tomar antimicrobianos cinco días antes de tomar la muestra. Si son de acción prolongada en un tiempo que no quede dentro de los límites de su acción.  Presentarse sin lavarse la boca ni la lengua, no se deben usar enjuagues bucales antisépticos antes del examen.

 

Se le pide al paciente que abra la boca se deprime su lengua con un abatelenguas estéril de madera, se ilumina lo mejor posible su garganta, se frota firmemente el hisopo sobre las paredes de la faringe y ambas amígdalas y en cualquier área de inflamación, ulceración y exudación, se debe evitar tocar la lengua o los labios para no diluir o contaminar la muestra. La garganta puede doler al momento del examen e igualmente se puede experimentar una sensación de náuseas cuando se toca la parte posterior de la garganta con el aplicador de algodón, pero el examen sólo dura unos cuantos segundos.

Los cultivos de garganta se obtienen casi siempre para el diagnóstico de faringoamigdalitis aguda, patología más frecuente de las vías respiratorias, particularmente en niños. Desde el punto de vista práctico las faringoamigdalitis pueden ser clasificadas en virales y bacterianas donde las primeras constituyen el porcentaje más elevados de los casos (hasta el 80%). En cuanto a los microorganismos bacterianos, Streptococcus hemolítico grupo A y Corynebacterium diptheriae, son los únicos 7 realmente responsables del cuadro, de manera que solo el primero de ellos debe ser considerado, ya que actualmente la incidencia de la faringoamigdalitis diftérica ha disminuido considerablemente, gracias a la inmunización con vacuna específica (D.P.T.); por lo que también se observa una disminución importante en la cifra de mortalidad, a lo que además ha contribuido el tratamiento con antitoxina diftérica y antimicrobiano específico. 

 

 Exudado Faringeo 

 

OBJETIVOS

 

 

1.- Aislar micrcroorganismos de un exudado faringe e identificar si esta causando  una infección o forma parte de la microbiota normal de paciente.

 

2.- Interpretar las pruebas bioquímicas para dar un correcto diagnóstico.

 

3.- Relacionar los resultados obtenidos con los síntomas presentes en el paciente.

 

4.- Comparar lo obtenido con la biliografía consultada. 

 

1.- Obtener una muestra de exudado faringeo,  la persona a la cual se le tome la muestra no debe haberse aseado la boca y no bdebe  haber consumidoalgún antibiotico min. 7 días antes.

 

2.- Colocar la muestra en un medio de transporte como Amies sin carbon o un Stuart, conservarlos a temperatura ambiente.

 

3.- Sembrar la muestra por estria cruzada en los medios de cultivo seleccionados e incubar a 37°C por 24 horas.

Medios empleados: Gelosa Sangre, Gelosa Chocolate,  Sal y Manitol, MacConkey y EMB. 

 

5.- Observar  si si existe crecimiento bacteriano, de las colonias aisladas identificar sus morfología macroscopicas.

 

6.- Realizar una tinción de Gram para identificar sus caracteritsticas microscópicas. 

METODOLOGÍA

Colonia 2

Cocos en Racimo Gram positivo, 100X

Colonia 1

Cocos Gram Positivos, 100X

Morfología Microscópica

Tinción de Gram

 

 

Morfología

Macroscópica/Colonial

 

Medio GS

Colonia 1

 

Color: Verde

Forma: Puntiforme

Consistencia: Cremosa

Tamaño: 1 mm

Hemólisis: Alfa hemólisis

 

Medio GS

Colonia 2

 

Color: Blanco

Forma: Puntiforme

Consistencia: Cremosa

Tamaño: 1 mm

Hemólisis: Gamma hemólisis

 

 

 

RESULTADOS

 

Muestra 1

 

Organismo aislado: 

Staphylococcus epidermidis

 

Organismo aislado: 

Streptococcus salivarius

Metabolismo Microbiano

Catalasa y Oxidasa

 

 Colonia 1

 

Catalasa: Negativa          

Oxidasa: Negativa

 

Colonia 2

 

Catalasa: Positiva

Oxidasa:  Negativa

Coagulasa: Negativa

Sensibilidad a: Novobiocina

 

S. epidermidis agrupado en racimo. Imágen cortesía de CDC by Melissa Brower.

Micrografía Electrónica de Barrido.  Streptococcus salivarius aislado de cavidad bucal, uno de los principales componentes de la microbiota normal del hombre.  Imágen cortesía de Dennis Kunkel Microscopy, Inc./Visuals Unlimited/Corbis.

Morfología Microscópica

Tinción de Gram

 

 

Morfología Colonial Macroscopica

 

Medio GC

 

Consistencia: Cremosa

Color: Blanquecino

Tamaño: 3 mm

Forma: Puntiforme

Hemólisis: Beta hemólisis

 

 

Medio EMB

 

Consistencia: Seca

Color: Incoloras

Tamaño: 3 mm

Forma: Puntiforme

 

Medio GS

 

Consistencia: Cremosa

Color: Blanco

Tamaño: 4 mm

Forma: Puntiforme

 

 

 

Resultados

Muestra 2

 

Organismo aislado: 

Streptococcus pyogenes

Metabolismo Microbiano

Prueba Catalasa y Oxidasa

 

Medio GC

 

Catalasa: Negativo

 

Oxidasa: Negativo

 

 

 

Streptococcus salivariusy Staphylococcus epidermidis  fueron los organismos encontrados en la muestra 1.  Streptococcus salivarius  es una especie de bacteria esféricas gram-positiva que coloniza, principalmente, la boca y la zona respiratoria superior de seres humanos algunas horas después del nacimiento, por tanto, la exposición adicional a estas bacterias es inofensiva.  En este caso lo encontramos formando parte de la microbiota normal del paciente por lo cúal no se considero como infección.  

Muchas personas sanas tienen normalmente estafilococos en la piel, la nariz u otras áreas del cuerpo. La mayoría de las veces, el microbio no causa una infección ni síntomas. Esto se denomina ser colonizado con estafilococos. Estas personas se conocen como portadores y pueden propagar el estafilococo a otros. Algunas personas colonizadas por el estafilococo contraen una infección estafilocócica real que las hace enfermar cuando esta inmunosuprimidos.   Staphylococcus epidermidis  se presenta frecuentemente en la piel de humanos y de animales y en membranas mucosas, es la causa menos común en infecciones oportunistas. Además forma parte del 90% del total de microorganismos de piel y mucosas. Ambos microorganismo conforman parte de la microbiota del paciente previniendo la colonización de otras bacterias potencialmente patógenas.

 

En la muestra 2 procesada el agente etiológico fue Streptococcus pyogenes.Este es el patógeno más frecuente, es una importante causa de las enfermedades supurativas y no supurativas. Aunque son la causa más frecuente de faringitis bacteriana, estos microorganismos son importantes por que pueden producir enfermedades graves de riesgo vital. Los estreptococos del grupo A colonizan normalmente la orofaringe de los niños sanos y de los adultos jóvenes. Aunque se considera que la incidencia del estado de portador es del 15 al 20%, estos datos son equívocos.Produce algunas infecciones como Infecciones de la vía respiratoria superior, de la piel y de los tejidos blandos (por ejemplo faringitis, celulitis, erisipela).

 

 

 

Análisis de Resultados

Se determinaron los agentes etiológicos de las muestra problema uno, Streptococcus salivarus y Staphylococcus epidermis como parte de la microbiota normal del paciente, es decir, el paciente no presenta ninguna infección. Mientras que la segunda muestra procesada el agente etiológico encontrado fue Streptococcus pyogenes que estaba causando infección y que es la causa mas frecuente de faringitis bacteriana que puede llegar a presentarse en niños sanos y jovenes adultos en un 15 y 20%. 

 

BIBLIOGRAFÍA

 

 

Microbiología Medica, cuarta edición. Patrick R. Murray, Ken S. Rosenthal, Gorge S. Kobayashi y Michael A. Pfaller. Edición en español. Elsevier España S. A Genora 17, 3º 28004 Madrid. España.

 

 

 

-Microbiología Medica, De Jawetz, Melnick y Aldelberg. D. R. 1999 Editorial El Manual Moderno, S. A de C. V 06100 México. D. F.

 

-Montoya Villafañe. 2008.  Microbiología básica para el área de la salud y afines. 2a edición. Universidad de Antioquia.

 

-Gamazo, López-Goñi y Díaz.  2005. Manual práctico de microbiología. Elsevier España.

 

 

 

 

CRÉDITOS

 

Castro P. Denia

González F. Goretti

 

 

CONCLUSIONES

 

MEDIOS DE CULTIVO

 

 

Gelosa Sangre

Medio: Enriquecido y diferencial

Color: Rojo cereza

Fundamento

Medio para propósitos generales. La infusión de músculo de corazón y la peptona,con la adición de sangre, le otorga al medio un alto valor nutritivo, permitiendo el crecimiento de una gran variedad de microorganismos aerobios y anaerobios, aún  aquellos nutricionalmente exigentes. permite detectar la capacidad hemolítica de microorganismos patógenos.

 

Gelosa Chocolate

Medio: Enriquecido

Color: Café chocolate

Fundamento

Medio adeacuado para aislar microorganismos exigentes. Es un medio enriquecido y no selectivo.

La mezcla de peptonas son el elemento nutritivo del medio. Los fosfatos tamponan el pH y el sodio cloruro mantienen el nivel salino adecuado para el buen crecimiento de los microorganismos. El elmidón de maíz ejerce una acción neutralizante ante las posible presencia de tóxicos producidos en el metabolismo bacteriano. La adición de sangre de caballo lisada o hemoglobina soluble permite que las bacterias que requieren el NAD y hematina, puedan crecer.

 

 

Medio MacConkey

Medio MacConkey

Medio: Selectivo y diferencial

Color: rojo púrpura

Fundamento

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo

En el medio de cultivo, la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.  Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH, rojo neutro, la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.  Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

 

 

 

 

Medio EMB

Medio: Selectivo y diferencial

Color: púrpura

Fundamento

Utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.  Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras.

 

Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico verde.

 

Medio Salmonella-Shigella

Medio: Selectivo y diferencial

Color: rojo anaranjado

Fundamento

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp.

La presencia de sales biliares, verde brillante y citrato inhiben el crecimiento de bacterias Gram-positivas.  El mismo citrato en conjunto con el tiosulfato detienen el desarrollo de Coliformes y Proteus. Las bacterias que no fermentan lactosa dan colonias incolora, mientras que las que fermentan acidifican el medio y vira el rojo neutro, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Permite diferenciar entre microorganismos productores de ácido sulfhídrico, a partir del tiosulfato de sodio, las colonias crecen con centro negro.

 

Medio Sal-Manitol

Medio: Selectivo y diferencial

Color: rojo

Fundamento

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH de rojo a amarillo; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura.

 

Caldo tetrationato

Medio: Enriquecimiento y Selectivo

Color: suspensión blanco lechosa

Fundamento

Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos tóxicos. La presencia de tiosulfato de sodio, tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solución iodo-iodurada) y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima tetrationato reductasa, como  lo es Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la flora acompañante.

 

Nota: Para evitar el crecimiento de Proteus spp., se recomienda agregar 40 mg/l de Novobiocina, antes de la solución iodada.

 

Medio Verde Brillante

Medio:  de enriquecimiento y Selectivo

Color: verde

Fundamento

En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira con la producción de ácido a partir de la fermentación de azúcares, formando colonias amarillo verdoso con halo verde-amarillento; y el verde brillante actúa como agente selectivo, inhibiendo el crecimiento de flora Gram-positiva.

 

 

ANEXO

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PRUEBAS BIOQUÍMICAS

ANEXO

 

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

ANEXO

 

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

ANEXO

 

PRUEBAS BIOQUÍMICAS