BACTERLABS

CAZANDO MICROBIOS

Tecnicas aplicadas a:

Exudado vaginal

Exudado faringeo

Coprocultivo

 


Datos de microbiota, resultados de cultivo, identificacion con CHROMagar y pruebas bioquimicas que se pueden utilizar

EDICIÓN OCTUBRE 2016-#2

MÉXICO  $200.00

EUA         $2000.00

EUROPA  €3000.00

EDICIONES UNIVERSIDAD JUSTO SIERRA

MICROBIOTA VAGINAL

La microbiota vaginal, dominada por Lactobacillus crispatus, L. jensenii y L. gasseri, protege a la mucosa frente al establecimiento de microorganismos patógenos mediante tres mecanismos complementarios: a) la adherencia específica al epitelio, que bloquea su asentamiento, b) la producción de compuestos antimicrobianos y c) la coagregación con los patógenos, que potencia su efecto microbiocida. A pesar de ello, en ocasiones se ve desplazada por microorganismos indeseables, lo que se asocia con la aparición de vaginosis bacteriana, vaginitis por Candida spp., tricomoniasis e infecciones del tracto urinario inferior. Muy raramente, los lactobacilos causan patología, invariablemente en pacientes inmunodeprimidos. Los cuadros dominantes son bacteriemias (alrededor del 50% de los casos) y endocarditis (30%). Sin embargo, no se ha descrito patología genital por lactobacilos. El efecto mutualista de los lactobacilos sugiere que su instilación podría regenerar el ecosistema vaginal, eliminando las recidivas asociadas al tratamiento de la infección.

exudado vaginal

Forma de obtener muestra

Diagnostico

Las pruebas diagnósticas de vaginosis bacteriana se dividen en dos categorías a saber; criterio clínico (de Amsel) y criterio basado en laboratorio (de Nugent). En ambos casos se requiere de la toma muestra de secreción vaginal con un hisopo estéril. 

La VB categorizada por los criterios de Amsel incluye cuatro características, de las cuales al menos tres parámetros deben estar presentes para poder hacer el diagnóstico: 1) descarga transvaginal lechosa de color grisáceo o amarillento; 2) pH vaginal de más de 4.5; 3) prueba de aminas positiva (cuando se le agrega una solución alcalina - KOH al 10% a la secreción vaginal, esta emite un olor fétido similar al que produce el pescado) y 4) presencia de grupos de células de descamación, llamadas células clave.

El sistema de Nugent clasifica la microbiota vaginal en normal, intermedia y VB, para lo cual se cuantifican los lactobacilos y otros dos morfotipos: cocobacilos Gram variable/ gramnegativos, característicos de Gardnerella vaginalis/Prevotella spp., respectivamente y a bacilos Gram variable curvos que caracterizan a Mobiluncus spp

 

Consecuencias en la modificacion en microbiota

PROCEDIMIENTO EN LABORATRIO

La muestra fue tomada en el Hospital General de México, a una paciente de 35 años de edad, la cual fue a realizarse unexamen de rutina.

La muestra fue depositada en un medio Stuart para mantener a los microorganismos presentes durante 24h hasta su procesamiento.

Se utilizaron medios de cultivo enriquecidos y de enriquecimiento para poder tener la mayor cantidad de bacterias. Se respaldo la siembra con el uso de CHROMagar

La tipificacion por CHROMagar se basa en detectar el ARN ribosmal para tener un resultado mas exacto, tambien dependiendo del color de la colonia es la bacteria que podemos encontrar.

En esta practica no se encontraron ningun otro tipo de microorganismos, solo microbiota normal, se apoya el diagnostico con la tipifcacion por CHROMagar, al final de la revista se anexan las pruebas bioquimicas a utilizar

Crecimiento de bacilos en CHROMagar

Durante la tincion de Gram se logro distinguir bacilos aislados en su mayoria Gram positivos, correspondientes a la microbiota normal vaginal

Bacilos Gram positivos

exudado faringeo

MICROBIOTA NORMAL

Los microorganismos que causan infecciones del tracto respiratorio superior deben entrar en contacto con el epitelio de la mucosa, adherirse y multiplicarse . Las infecciones pueden ser endógenas o exógenas:

Exógenas: La mayoría mayoría son transportados transportados por aerosoles aerosoles, otros se transmiten a través de contacto en condiciones de hacinamiento o de falta de higiene.

 Endógenas, generalmente los microorganismos de la microbiota normal no causan infecciones, pero en algunos casos si.

Procedimento de obtener el exudado

LO QUE PODEMOS ENCONTRAR

Staphylococcus aureus

Bacteroides

Staphylococcus epidermidis Fusobacterium Peptostreptococcus

Streptococcus pneumoniae Veillonella

Streptococcus mitis

Eikenella

Streptococcus salivarius

Haemophilus influenzae

H. parainfluenzae

Mycoplasma

Neisseria

Corynebacterium

Branhamella

Candida albicans

Este examen se realiza para determinar las causas de algunainfección de nariz y garganta con frecuencia, este tipo de afecciones se deben a un virus, pero el cultivo permite determinar cuándo se debe a una bacteria (principalmente estreptococo).

Cabe señalar que un cultivo de este tipo también puede hacerse con prueba de antibiograma, la cual le ayuda al médico a determinar qué antibióticos funcionarán mejor en el tratamiento.

Plas de gelosa chocolate y gelosa sangre, con colonias presuntamnete de Streptococcus salivarius

PROCEDIMIENTO EN LABORATORIO

La muestra se tomo en las instalaciones de la Universidad Justo Sierra plantel Acuedcuto, a un individuo masculino de 20 años de edad, aparentemente sano de vias aereas. 

No se utilizo ningun medio de transporte ya que se proceso de inmedianto la muestra.

Se utilizaron medios gelosa sangre y gelosa chocolate para tener la mayor cantidad de bacterias posibles.

Tambien se utilizo el CHROMagar para poder realizar la tipificacion correspondiente.

 

Medios de culivo. Gelosa Sangre y Gelosa Chocolate

MORFOLOGIA COLONIAL MACROSCOPICA

En ambas placas se nota una hemolisis alfa ya que se aprecia un color verdoso alrededor de las colonias, estas son redondas, uniformes y convexas

GRAM

La tincion de Gram nos mostro cocos agrupados en cadena positivos, lo cual confirma la sospecha de diagnostico

La tipificacion por CHROMagar indica que el diagnostico es correcto, hay una presencia de Staphylococcus salivarius.

Tincion de Gram, mostrando a Staphylococcus salivarius

coprocultivo

Este examen consiste en estimular el crecimiento de cualquier microorganismo presente en los fragmentos de las materias fecales del paciente para buscar e identificarbacterias patógenas normalmente ausentes en el tubo digestivo y que pueden provocar diarreas e infecciones digestivas en el individuo. 
Por tanto, este examen pretende detectar la presencia de gérmenes o bacterias perjudiciales como laSalmonella, Shigella,Campylobacter,Escherichia coli o Vibrio cholerae. 
Estas afecciones provocan la aparición de síntomas como los dolores de estómago, vómitos, fiebre, diarreas y diarreas agudas, crónicas, febriles o no. El enfermo afectado por diarreas emite heces líquidas, viscosas o hemorrágicas. 

Se necesita seguir todas las indicaciones para poder evitar un error en el procedimiento

MORFOLOGIA COLONIAL MACROSCOPICA

En las placas se nota el cambio de color de cada indicar de ph, se presume de E.coli, en las colonias se denotan redondas, brilantes y convexas.

En EMB se ve el cambio de color verde del medio y en MacConkey las colonias son rosas.

PROCEDIMIENTO EN LABORATORIO

La muestra fue tomada en e Hospital General de Mexico, paciente masculino de 25 años de edad acude para realizarse analisis de rutina, se le pide muestra fecal no mayor a 12 h, se transporto en medio Stuart.

Para aisalar enterobacterias se eligio un medio de cultivo EMB y MacConkey, para este fin se esperaria encontrar bacterias Gram negativas.

Ademas reforzamos diagnostico con CHROMagar.

 

Placas con los medio de cultivo, se nota claramente crecimiento de E. coli

Medios de cultivo utilizados, medio EMB y MacConkey

GRAM

La tincion de Gram nos ayuda a distinguir bacilos aislados negativos, claramente señalando E.coli

La tipificacion de CHROMagar indica que la bacteria presente en el coprocultivo es E. coli

Bacilos Gram negativos, confirmando E.coli

Bioquimicas Gram negativo

TSI: lleva 3 azúcares: glucosa 0,1%, sacarosa y lactosa 1%; y  hierro. Lleva un indicador de pH rojo fenol (amarillo-naranja-rojo), tampón neutro y peptona. Se inocula por picadura con la aguja de siembra y luego hacemos zigzag en la superficie del medio, por lo que hacemos dos lecturas:

1) Fermentación sólo de glucosa: en la zona anaerobia se producen ácidos por la fermentación de la glucosa y, una vez se acaba ésta, se echa mano de las peponas, dando productos básicos y amoniaco, con lo que en la zona de picadura nos podemos encontrar 2 colores: rojo y amarillo. En la zona aerobia, se respira la glucosa, dando ácido pirúvico,Por lo que predomina un ambiente básico, con lo que la zona superior del medio será de color rojo. 

2)  Producción de SH2: Las enterobacterias son capaces de reducir el tiosulfato a sulfhídrico.El medio lleva tiosulfato. La detección de la transformación la detectamos con sal de hierro, que se combina con el sulfuro de hierro yproduce precipitado negro. 

 

Caldo urea: es un medio líquido con rojo de fenol y tampón neutro, lleva glucosa y urea. Si la bacteria tiene la ureasa y desdobla la urea en CO2 y NH3, sube el pH.

Caldo de lisina: tiene color violeta intenso (indicador de pH púrpura de bromocresol) y lleva lisina. Si la bacteria tiene la enzima lisina descarboxilasa, la bacteria primero utiliza la glucosa del medio y el pH baja, pero si además tiene la enzima, es capaz de formar diamina, que alcaliniza el medio, volviéndose violeta, como al principio, indicando que la prueba es positiva.

Oxidasa: Tomamos una colonia de un medio sólido y la frotamos en la zona con reactivo. Si se reduce el reactivo, que es tetrametilparafenilen diamina, entonces el espécimen es oxidasa+, dando un color azul oscuro.

Manitol-movilidad: es un tubo con medio sólido en el que vamos a sembrar por picadura. Nos permite ver si se produce gas con la fermentación. Lleva rojo fenol. Si el medio se vuelve amarillo,es que la bacteria es manitol+. Además, también podemos observar la movilidad si existe turbidez en el medio.

Caldo indol: es un caldo al que se le añade triptófano. Se revela con este caldo la producción de triptofanasa, que desdobla el triptófano en indol y alanina, produciéndose luego ácido pirúvico y amoniaco. A esta prueba, después de la incubación, hay que añadir un reactivo, que puede ser: Kovacs, Ehrlich o James. Lleva un alcohol que forma una fase orgánica hidrófila. Si la bacteria es indol+,se forma un anillo coloreado

Bioquimicas Gram positivo

Agar saladolleva un 7,5%  de NaCl. Se inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias, y lo que se intenta es poner de manifiesto a Staphilococcus. Se siembra por agotamiento en estrías en placa de Petri.

Catalasa: se toma una pequeña cantidad de colonia y se pone en un porta. Añadimos peróxido de hidrógeno al 30%. Si existe burbujeo, es que se está produciendo H2O y O2, poniendo de manifiesto a la catalasa. Esto nunca lo debemos hacer con colonias que procedan de un medio Agar-sangre, porque siempre da positivo.

Prueba de Desoxirribonucleasa: se utiliza el Agar DNAasa. Sembramos con una estría única de aproximadamente 2 cm de longitud y se incuba a 37ºC durante 24 horas. Después de incubar añadimos, inundando la placa, HCl 0,1 N que reacciona con el DNA presente apareciendo una zona turbia. A los 5 minutos realizamos la lectura de los resultados: es positiva si aparece una zona clara alrededor de la línea de siembra, se considera prueba negativa si aparece turbidez en toda la superficie del medio de cultivo, Sin HCl el medio contiene: Verde de Metilo: positiva: halo claro / negativa: verde intenso y Azul de Toluidina: positiva: halo rosa / negativa: halo azul

Coagulasa: S. aureus es capaz de producir una proteína llamada Coagulasa que es capaz de aglutinar el plasma en presencia de un factor contenido en el suero.Estudio de esta actividad coagulasa se puede llevar a cabo en tubo o en portaobjetos:

  • · Poner una gota estéril de agua destilada o solución salina fisiológica sobre el porta.
  • · Emulsionar suavemente con una suspensión espesa de Staphylococcus o una colonia tomada con un asa.
  • · Mezclar suavemente la suspensión de Staphylococcus con el plasma que podamos tomar con un asa.
  • Observar la inmediata formación de un precipitado macroscópico. Incubar en un baño a 37ºC durante 4 horas. Observar cada 30 min.  Las bacterias patógenas son coagulasas+. Esta prueba es correlativa con la prueba DNAsa.

Actividad Fosfatasa: Algunas especies de S. aureus y S. epidermidis producen la Fosfata Alcalina. Esta enzima actúa sobre el Difosfato de Fenolftaleina y los transforma en Fenolftaleina libre. Esta, al reaccionar con un álcali da lugar a un color rojo rosado brillante.

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"SABE QUE VIVE CUANDO CONCIBE EL PUNTO EN DONDE BIEN Y MAL SE FUNDEN"

ESTA OBRA TERMINO DE IMPRIMIERSE EN LAS OFICINAS DE EDICIONES JUSTO SIERRA EN EL DEPARTAMENTO DE QUIMICO FARMACEUTICO BILOGO EL 27 DE OCTUBRE DEL 2016, CIUDAD DE MEXICO