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BACTERLABS

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bacteria problema

PARA PONER A PRUEBA NUESTROS CONOCIMIENTOS, SE NOS DIO UN MEDIO DE TRANSPORTE CON UNA BACTERIA PARA PODER IDENTIFICARLA

ESPECIAL DE EXPECTORACIÓN 

CONOCEREMOS EL PROCESO, ADEMÁS DEL FUNDAMENTO DE TINCIÓN ZIEHL-NEELSEN

CAZANDO MICROBIOS

identificación de muestra

NOS ADENRAMOS EN EL PROCESO DE IDENTIFICAR UNA BACTERIA DE UNA MUESTRA DESCONOCIDA, ¿LOGRAREMOS SABER QUE CONTIENE LA MUESTRA?

CONOZCA MÁS SOBRE BACTERIOLOGIA

EDICIÓN DICIEMBBRE 2016-#3

MÉXICO  $200.00

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EDICIONES UNIVERSIDAD JUSTO SIERRA

EXPECTORACÍON

La mayoría de veces en el areá clinica el poceso de expectoracíon es mandado para revelar la presencia de Mycobacterium tuberculosis, esto para llegar a un rápido diagnostico y despues refozarlo con el cultivo 

Como vemos en la figura, la estrucutura de este bacilo es distinta, ya que por arriba del peptidoglucano, encontramos acidos grasos, y aqui es donde entra el fundamento de la tinción, cuando evaporamos la muestra realmente derretimos esos acidos grasos para que el colorante se intercale y quede fijo a la estrucutra

Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis, es un bacilo ácido alcohol resistente (BAAR) por lo cual la tinción de Gram no es efeciva, en estos casos ocuparemos la tinción de Ziehl-Neelsen

Para tener nuestra muestra se le debe pedir al paciente el primer  del día, cabe mencionar que este no debe de sr forzado, se coloca en un medio de transporte y se debe de procesar lo antes posbile

Despues realizamos un extendido de la muestra sobre un portaobjetos y continuamos con la tinción como se explica abajo

Durante este proceso se tiene que tener en cuenta las maximas precauciones, tambien es necesario ocupar cubrebocas y guantes

Es importante checar los tiempos del colorante para tener una optima tinción

¿que vimos al microscopio?

Las muestras fueron propocionadas al azar, entonces no sabiamos que se encontraba en ellas. La vista del frotis al microscopio resolveria nuestra duda

Colonias presentes en el medio de cultivo Lowenstein-Jensen

Frotis listos para ser teñidos

Frotis postivo de Mycobacterium tuberculosis

Medio de cultivo

Para terminar de complementar nuestro diagnostco pasamos al medio, el que ocupamos es el Lowenstein-Jensen, que tiene como componentes huevo, verde de malaquita y fuentes de carbono, este medio es muy efectivo para el crecimiento de Mycobacterium tuberculosis

El resultado para esta practica fue positivo, desde el uso de la baciloscopia se determino pero ocupamos el medio para reforzar esta tecnica, el uso de equipo de seguridad durante la extraccion y procesamiento de muestra es fundamental para evitar contagios.

Pasando unas semanas, se comenzo a ver el crecimiento

MUESTRA DESCONOCIDA

Un dia tranquilo en el laboratorio, cuando nadie lo esperaba se nos entregaron unos tubos con muestras de pacientes. Le llamaremos a nuestro paciente Diego. La muestra de Diego no parecia revelar algo a simple vista, asi que le dimos manos a la obra.

Se revisaron las placas y en sangre, MacConkey y CHROMagar se observó un crecimiento, de morfologia similar, donde no se reporto crecimineto es en Sal-Manitol

La muestra se sembró mediante estria cruzada y se incubó cada medio a 37°C por 24h. 

Para abarcar todas las posibilidades, se sembraron en medios ricos y selectivos-diferenciales. En esta ocasion se ocuparon agar sangre, MacConkey ,Sal-Manitol y CHROMagar

Morfologia macroscopica

Agar Sangre

Colonias convexas, brillantes, de color gris, bordes irregulares.

Agar MacConkey

Colonias convexas, brillantes, de color morado, bordes irregulares.

CHROMagar

Colonias convexas, brillantes, de color azul, bordes irregulares.

La determinación por CHROMagar nos reveló que se trataba de Klebsiella sp. por cuestiones de edicion no se incluyeron bioquimicas, pero encontramos un anexo al final de este numero.

Vista microscopica del Gram 

Morfologia microscopica

Bacilos aislados Gram negativos

bacteria problema

La llegada al laboratorio de un medio de transporte siempre significan nuevos retos. En esta ocasión llego un medio AIMES, el objetivo era determinar que bacteria se encontraba ahi

Para este trabajo se ocupó agar Sangre, chocolate, MacConkey, Sal-Manitol y CHROMagar, se sembro por estria cruzada, se dejo incubar 24h a 37°C 

Al observar el cfecimiento se revisó la literatura para podr encontar a la bacteria

Morfologia macroscopica

Agar Sangre

Borde irregular, color blanco, convexa, brillante y de forma estrellada

Agar Chocolate

Borde irregular, color blanco, convexa, brillante y de forma estrellada

CHROMagar

irregular, color azul turquesa, convexa, brillante y de forma estrellada.

MacConkey 

sin crecimiento

Sal-Manitol

sin crecimiento

Placas de medios de cultivo donde se muestran las colonias y las caracteristicas de cada una mencionadas en la morfologia macroscopica

Morfologia microscopica

Bacilos Gram positivos

Tinción de Gram

LIA positivo, aprovechamiento del citrato y reduccion de ph

pruebas bioquimicas

Se aplicaron 6 pruebas bioquimicas, lo que nos decia la bibliograiaea la posible presencia de Listeria sp, asi que aplicamos las bioquimicas para este tipo de bacteria.

MIO positivo, movilidad presente

TSI positivo, fermentacion de glucosa

Se ocupó bilis esculina, TSI, LIA, MIO, citrato de Simmons y MIO, ademas de la prueba de Camp.

Citrato de Simmons positivo, cambio del color del medio uso del citrato como fuente de carbono

Bilis esculina positivo, hidrolisis de la esculina

Al observar estas bioquimicas y la prueba de Camp se relacionó con Listeria sp, ademas de que la revisión por CHROMagar reforzara nuestro diagnostico presuntivo.

Tinción de Gram de muestra

Microscopia electronica de Listeria sp

ANEXO DE PRUEBAS bIOQUÍMICAS

Bioquimicas Gram negativo

TSI: lleva 3 azúcares: glucosa 0,1%, sacarosa y lactosa 1%; y  hierro. Lleva un indicador de pH rojo fenol (amarillo-naranja-rojo), tampón neutro y peptona. Se inocula por picadura con la aguja de siembra y luego hacemos zigzag en la superficie del medio, por lo que hacemos dos lecturas:

1) Fermentación sólo de glucosa: en la zona anaerobia se producen ácidos por la fermentación de la glucosa y, una vez se acaba ésta, se echa mano de las peponas, dando productos básicos y amoniaco, con lo que en la zona de picadura nos podemos encontrar 2 colores: rojo y amarillo. En la zona aerobia, se respira la glucosa, dando ácido pirúvico,Por lo que predomina un ambiente básico, con lo que la zona superior del medio será de color rojo. 

2)  Producción de SH2: Las enterobacterias son capaces de reducir el tiosulfato a sulfhídrico.El medio lleva tiosulfato. La detección de la transformación la detectamos con sal de hierro, que se combina con el sulfuro de hierro yproduce precipitado negro. 

 

Caldo urea: es un medio líquido con rojo de fenol y tampón neutro, lleva glucosa y urea. Si la bacteria tiene la ureasa y desdobla la urea en CO2 y NH3, sube el pH.

Caldo de lisina: tiene color violeta intenso (indicador de pH púrpura de bromocresol) y lleva lisina. Si la bacteria tiene la enzima lisina descarboxilasa, la bacteria primero utiliza la glucosa del medio y el pH baja, pero si además tiene la enzima, es capaz de formar diamina, que alcaliniza el medio, volviéndose violeta, como al principio, indicando que la prueba es positiva.

Oxidasa: Tomamos una colonia de un medio sólido y la frotamos en la zona con reactivo. Si se reduce el reactivo, que es tetrametilparafenilen diamina, entonces el espécimen es oxidasa+, dando un color azul oscuro.

Manitol-movilidad: es un tubo con medio sólido en el que vamos a sembrar por picadura. Nos permite ver si se produce gas con la fermentación. Lleva rojo fenol. Si el medio se vuelve amarillo,es que la bacteria es manitol+. Además, también podemos observar la movilidad si existe turbidez en el medio.

Caldo indol: es un caldo al que se le añade triptófano. Se revela con este caldo la producción de triptofanasa, que desdobla el triptófano en indol y alanina, produciéndose luego ácido pirúvico y amoniaco. A esta prueba, después de la incubación, hay que añadir un reactivo, que puede ser: Kovacs, Ehrlich o James. Lleva un alcohol que forma una fase orgánica hidrófila. Si la bacteria es indol+,se forma un anillo coloreado

Bioquimicas Gram positivo

Agar saladolleva un 7,5%  de NaCl. Se inhibe el crecimiento de la mayoría de las bacterias, y lo que se intenta es poner de manifiesto a Staphilococcus. Se siembra por agotamiento en estrías en placa de Petri.

Catalasa: se toma una pequeña cantidad de colonia y se pone en un porta. Añadimos peróxido de hidrógeno al 30%. Si existe burbujeo, es que se está produciendo H2O y O2, poniendo de manifiesto a la catalasa. Esto nunca lo debemos hacer con colonias que procedan de un medio Agar-sangre, porque siempre da positivo.

Prueba de Desoxirribonucleasa: se utiliza el Agar DNAasa. Sembramos con una estría única de aproximadamente 2 cm de longitud y se incuba a 37ºC durante 24 horas. Después de incubar añadimos, inundando la placa, HCl 0,1 N que reacciona con el DNA presente apareciendo una zona turbia. A los 5 minutos realizamos la lectura de los resultados: es positiva si aparece una zona clara alrededor de la línea de siembra, se considera prueba negativa si aparece turbidez en toda la superficie del medio de cultivo, Sin HCl el medio contiene: Verde de Metilo: positiva: halo claro / negativa: verde intenso y Azul de Toluidina: positiva: halo rosa / negativa: halo azul

Coagulasa: S. aureus es capaz de producir una proteína llamada Coagulasa que es capaz de aglutinar el plasma en presencia de un factor contenido en el suero.Estudio de esta actividad coagulasa se puede llevar a cabo en tubo o en portaobjetos:

  • · Poner una gota estéril de agua destilada o solución salina fisiológica sobre el porta.
  • · Emulsionar suavemente con una suspensión espesa de Staphylococcus o una colonia tomada con un asa.
  • · Mezclar suavemente la suspensión de Staphylococcus con el plasma que podamos tomar con un asa.
  • Observar la inmediata formación de un precipitado macroscópico. Incubar en un baño a 37ºC durante 4 horas. Observar cada 30 min.  Las bacterias patógenas son coagulasas+. Esta prueba es correlativa con la prueba DNAsa.

Actividad Fosfatasa: Algunas especies de S. aureus y S. epidermidis producen la Fosfata Alcalina. Esta enzima actúa sobre el Difosfato de Fenolftaleina y los transforma en Fenolftaleina libre. Esta, al reaccionar con un álcali da lugar a un color rojo rosado brillante.

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"SABE QUE VIVE CUANDO CONCIBE EL PUNTO EN DONDE BIEN Y MAL SE FUNDEN"

ESTA OBRA TERMINÓ DE IMPRIMIERSE EN LAS OFICINAS DE EDICIONES JUSTO SIERRA PLANTEL ACUEDUCTO EN EL DEPARTAMENTO DE QUÍMICO FARMACÉUTICO BIÓLOGO, DICIEMRE DEL 2016, CIUDAD DE MÉXICO