Introduccion a la histologia animal

*Elaboro: Soriano Carrillo Estefany

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL 

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

Para ello es necesario

-La preparacion de materiales para el estudio microscopico

- Observar, describir e interpretar imagenes (dando un significado biologico)

-Buscar materiales de apoyo

- Analizar y crear conocimientos relacionando con las imagenes trabajadas.

Resoluciòn de problemas histològicos

 Histologia y analisìs microscòpico

Definiciòn

 

Del griego histós "tejido" y logía, "tratado, estudio, disciplina"

 

Es la disciplina que estudia todo lo relacionado con los tejidos, asi como su estructura microscópica, su desarrollo y sus funciones. 

 

Marcello Malpighi es el fundador de la histología y su nombre aún está ligado a varias estructuras histológicas.

 

Las primeras investigaciones histológicas fueron posibles a partir del año 1600, cuando se incorporó el microscopio a los estudios anatómicos

 

Componentes

1.- Investigacion documental

Se refiere a la busqueda, organizacion y utilizacion de informacion.

Es importante para la elaboracion de escritos, base para la construccion y  apoyo de cualquier conocimiento. Lo conforman tres elementos:

 

DATOS BIBLIOGRAFICOS

 

La consulta bibliografica se remite a las fuentes, autores y obras que traten sobre el tema de estudio. En el caso de la histologia, y otras diciplinas, la consulta ademas de los datos es tambien de esquemas y fotografias que se complementan. Para ello se requiere:

 

- Busqueda de informacion en fuentes adecuadas ( libros, revistas, catalogos de bibliotecas, casas editoriales, diccionarios especializados, etc)

 

-Corroborar la utilidad de la referencia (revisando resumenes e indices)  y seleccionar los materiales adecuados.

 

-Revision y analisis de la informacion para obtencion de datos o conceptos requeridos.

 

 * Se debe realizar una lectura general y posteriormente una segunda lectura cuidadosa extrayendo los elementos mas importantes.

 

*Anotar lo necesario o subrayar (si el material lo permite ) las palabras, frases o parrafos importantes.

 

*Ser critico y evitar exceso de notas o subrayados.

 

 

 

 

ELABORACION DE ESCRITOS


En la practica diaria puede que exista la necesidad de redactar un escrito a partir de un objeto de estudio conocido o no. 

 * Se debe trazar el plan para su elaboracion, buscar y organizar los datos bibliograficos .

 

 

 

FICHA BIBLIOGRAFICA Y FICHERO

 

La ficha es una memoria, un almacen o un deposito de datos para un ivestigador, ya que le permite sistematizar y organizar sus ideas, para posteriormente elaborar sus escritos.

 

En la ficha textual se colocan integramente los fragmentos del material consultado.

 * Es necesario que siempre se anote la cita bibliografica, para identificar la obra consultada. Existen diferentes formas de hacerlo, dependiendo de las  editoriales o revistas.

 

Un fichero, permite organizar las fichas y asi mismo permite saber la ubicacion cosntante del material bibliografico.

 

 

 

2.- Tècnica histològica

Proceso que lleva a la obtenciòn de cortes de òrganos preparados adecuadamente para poder efectuar el estudio microscòpico de sus componentes: Tejidos y cèlulas. 

 

Para el estudio microscòpico de los componentes de un organismo (òrganos tejidos y cèlulas) se recurre a varios procedimientos dependiendo de la naturaleza del material y las necesidades del estudio. 

 

-Elaboraciòn de cortes

-Frotis

-Cèlulas y tejidos en cultivo

-Etc.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

PASOS DE LA TÈCNICA HISTOLÒGICA

 

*Obtenciòn del material y fijaciòn 

 

El material histològico se refiere a fragmentos de òrganos que se obtienen despuès de que el animal ha muerto o se ha anesteciado.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 Para conservar el material se inicia el proceso de FIJACIÒN ,el cual tiene como objetivos:

 

 1) Conservar el material lo màs semejante a su estado vivo.

 

2) Evitar descompociciòn por  enzimas intracelulares (autòlisis) y  multiplicaciòn de microorganismos que causan la putrefacciòn.

 

3) Prepararlo para su posterior tratamiento. 

 

 * Entre los fijadores màs comunes estàn: Formaldehido, alcohol, àcido pìcrico, tetròxido de osmio, permanganato de potasio, etc.

 

* Un buen fijador, debe de ser ràpido en su penetraciòn y acciòn cumplir los siguientes criterios:

 

-Tipo de estructuras a observar

-Fragilidad de los componentes

-Contenido de agua

-Tamaño de la muestra

-Objetivo del estudio a realizar

-Tècnica de coloraciòn a usar

 

 

 

Procedimiento para obtenciòn y fijaciòn de la muestra

 

1.-Extraer la pieza lo mas ràpido posible  (El tamaño no debe exceder los 0.5 cm) 

 

2.- Eliminar sangre lavando con solucion salina de NaCl al 0.09%

 

3.- Colocar la pieza en una bolsa de gasa y acompañar de una etiqueta con los datos necesarios escritos con làpiz (nombre del òrgano y animal, fecha y fijador usado, etc).

 

4.- Colocar la pieza en fijador con una relaciòn pieza-volumen 1:40 (comprobar a que temperatura se ralizarà la fijaciòn)

 

La eliminaciòn del fijador  es escencial, ya que interfiere con los sigientes pasos. El lavado se hace comùnmente con agua  o alcoholes en varias graduaciones.

MARCHA DE INCLUSIÒN

 

Tiene por objeto embeber a la pieza de una sustancia que: sustituya el agua y le proporcione firmeza y dureza.

* El material de inclusiòn por lo general es la parafina y se compone de los siguientes pasos:

 

-DESHIDRATACIÒN: Debido a que la parafina no es soluble en agua esta se elimina por medio de alcoholes en concentraciòn creciente, empezando por el alcohol de baja concentraciòn para evitar que el intercambio de agua por alcohol sea brusco y cause la retracciòn del tejido.

 

-TRANSPARENTACIÒN: Como la parafina tampoco es soluble en alcohol de sustituye por un solvente como tolueno, xileno o acetona, de igual manera en concentraciones gradientes.

 

-IMPREGNACIÒN CON PARAFINA: Se empieza con una parafina blanda que penetre con facilidad (55 ºC) , despuès aplica otra con mayor dureza (54-  56ºC ) y finalmente otra parafina mas dura (56-58 0 60 ºC ).

 

-INCLUSIÒN EN PARAFINA: Con la parafina de mayor dureza se hace un molde dentro del cual queda incluida la pieza y esta lista para ser cortsda por el microtomo.

COLORACIÒN

Tiene por objeto aumentar el contraste entre las diferentes estructuras. 

 

*Colorante: En biologìa se define como una sustancia capaz de combinarse quìmicamente o absorverse sobre las estructuras a las que imparte color . Se compone de tres elementos:

 

* Cromòforos: Grupos asociados con el color dado que absorven y emiten en longitudes de onda.

 

* Cromògenos: Compuestos coloridos con la potencialidad de trasnmitir su color.

 

*Auxòcromos: Para que un cromògeno se convierta en colorante necesita trasnformarse a un compuesto disociable esto se logra con la combinaciòn de estos grupos.

A sì mismo determinan en caràcter àcido o bàsico.

 

 

PROCEDIMIENTO PARA OBTENER CORTES EN MICROTOMO

 

1.- Colocar el bloque en la platina y fijarlo al brazo del microtomo. 

2.- Colocar la cuchilla, ajustar el bloque.

3.- Deslizar el carro de la cuchilla y reorientar la platina para que abos queden paralelos.

4.- Seleccionar los micròmeros necesarios  (-20 micròmeros)

5.- Separar los cortes y colocarlos en un baño de flotaciòn (50 ºC) en el que se disolviò gelatina.

6.- Introducir los cortes, extenderlos y montar en portaobjetos.

COLORANTES ÀCIDOS, BÀSICOS O NEUTROS

 

*ÀCIDO O ANIÒNICO: Su parte colorida es electronegativa y se une a componentes bàsicos (positivos).

 

*BÀSICO O CATIÒNICO: Su parte colorida es electripositiva y se une a componentes àcidos (negativos) 

 

*NEUTRO: Se ontiene de la combinaciòn de colorantes àcidos y bàsicos. Al variar condiciones de pH.

 

ACIDOFILIA Y BASIDOFILIA

 

Depende del tipo de estructuras y organelos celulares, asi como algunos componentes (proteìnas, nucleproteìnas, glicoproteìnas mucopilisacàridos y glicolìpidos) 

 

*Estructuras acidofilas como: mitocondrias, retìculo endopàsmico liso, eritrocitos, etc.

  

*Estructuras basofilas como: Nùcleo, nucleolo, Matriz amorfa del tejido conjuntivo.

 

 

TIPOS DE COLORACIONES

 

1) Atendiendo la intenciòn del trabajo 

 

Tècnicas topogràficas: Permite una visiòn general de los tejidos. Hematoxilina-Eosina.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

*Tènicas especiales: Se aplican para demostrat algùn componente en particular. Tècnica de Gallego para fibras elàsticas. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

*Tènicas hitoquìmicas: Por medio de una reacciòn quìmica se colorean sustancias especìficas Tènica de Sylven para mucopoisacàridos sulfatados.

 

 

2) Al uso o no de mordentes (Compuesto que forma un laca insoluble al combinarse con el colorante y tejido). 

 

* Coloraciòn directa: Se aplica el colorante sin mordente. Coloraciòn eosina.

 

*Coloraciòn indirecta: Se intensifica la coloraciòn por el uso de mordente. Coloracion hematoxilina.

 

TÈCNICA DE HEMATOXILINA-EOSINA

 

*Tècnica topogràfica 

*Coloraciòn regresiva 

*Intervien dos colorantes

 

 Hematoxilna (colorante bàsico) que tiñe el nùcleo, ribonùcleo y proteìnas citoplasmàticas, mielina, etc. Es un colorante natural obtenido del àrbol tropical Hematoxilum campechianum.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

El otro colorante es la Eosina (colorante àcido) que tiñe el citoplasma de un color contraste. 

 

 

 

PROCEDIMIENTO PARA LLEVAR A CABO LA TÈCNICA HEMATOXILINA-EOSINA

 

 

Resultados: Nùcleos azules, citoplasma rosa o rojo.

MONTAJE DE LAS PREPARACIONES

 

Es el ùltimo paso de la tècnica histològica para hacer permanente la preparaciòn y preservarla sin deterioro. 

Consiste en colocar un medio de montaje que sirve de adhesivo entre portaobjetos y cubreobjetos, manteniendo el corte transparente de manera que no se altere su color.

 

-Tipos de montaje

 

*En medio acuoso: En este caso el corte no necesita hidratarse, permite la conservaciòn de compuestos solubles en alcohol como lìpidos. Sin embargo, el tiempo de conservaciòn no es muy largo (debe sellarse con barniz a causa de eso).

 

 Ejemplo: Gelatina y goma aràbiga.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 *En medio no acuoso:La conservaciòn del material es pràcticamente indefinida y tiene mator resistencia al uso. Sin embargo la preparaciòn debe deshidratarse y transparentarse.

 

Algunas resinas naturales como Bàlsamo de Canadà pueden decolorar la preparaciòn.

 

 

Ademàs de identificar y describir se debe explicar  la relaciòn estructura-funciòn con la finalidad de darle significado a la observaciòn (Interpretaciòn).

 

Recomendaciones para realizar una observaciòn microscòpica

 

1.- Partir de lo general a lo particlular

2.- Identificar y diferenciar la forma de los componentes de la imàgen.

3.- Diferenciar los colores o tonos.

4.- Distinguir el arreglo o distribuciòn 

5.- Diferenciar su aspecto (denso, compacto, granular, fibroso)

Recomendaciones para una descripciòn microscòpica 

 

1.- Trabajar con limpieza.

2.- Representar la imàgen semejanrte a la observada.

3.- Guardar la relaciòn de tamaño y orden de las estructuras.

4.- Usar colores semejantes a la imagen observada.

5.- Acompañar el esquema con un pie de figura claro y explìcito.

 

 

Para efectuar una descripciòn escrita y oral

 

1.- Utilizar un vocabulario adecuado.

2.- Estructurar las frases correctamente, de manera concreta y precisa. 

3.- Letra legible

 

 

4.- Interpretaciòn de una imagen histològica

 

3.- Observaciòn y descripciòn

 

 

La division actual de 4 tejidos basicos fue establecida por un biologo suizo Albert Von Kolliker  (1817-1906).

 

Este cientifico diferenciaba:

¿Què es un tejido?

Los tejidos son el material de construccion del cuerpo. 

 

Segun la definicion de Wolfgang Bargmann (1906-1976)

 

"los tejidos son asociaciones de celulas semejantes o con diferenciacion similar, junto con sus derivados, las sustancias intercelulares"

 

La histologia estudia la estructura y funcion de estas asociaciones celulares.

 

CARACTERÌSTICAS MORFOLÒGICAS

 

  • Las cèlulas adquieren formas polièdricas y guardan entre sì un orden definido.
  • Las asociaciones entre las cèlulas muy juntas formando làminas
  • La sustancia intercelular es muy escasa.
  • Uniones por contactos celulares bien definidos 
  • En la base del epitelio hay una membrana basal. (que separa al epitelio de otros tejidos como el conjuntivo)
  • No hay precencia de vasos sanguìneos.
  • Puede dervarse de endodermo, mesodermo, ectodermo.

 

 

 CARACTERÌSTICAS FUNCIONALES

 

  • Revestimiento (En el àrbol respiratorio)
  • Protecciòn ( Epitelio intestional) 
  • Absorciòn ( Epitelio intestinal) 
  • Intercambio (Alveolos pulmonares) 
  • Secreciòn (Glàndulas salivales) 
  • Sensitivas (Epitelio olfatorio y gustativo)
  • Contractiblidad (Cèlulas mioepiteliales) 

 

 

Tejido epitelial

El termino Epitelio fue usado por primera vez por el investigador Ruysch en 1970 para desiganr el tejido que cubrìa los labios.

 

La palabra deriva de EPI= sobre y TELE= papila o pezòn

Clasificaciòn del tejido epitelial

* En base a forma de las cèlulas

 

Planas: Cèlulas aplanadas, en dònde el eje mayor es paralelo a la membrana basal (cèlulas màs largas que anchas) y su nùcleo es ovoide.

 

Cùbicas: Cèlulas isodiamètricas tan altas como anchas. Nùcleos esfèricos y centrales.

 

Cilìndricas: Cèlulas màs altas que anchas. Nùcleo ovoide y basal.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 * En base al nùmero de capas

 

Simple: Formados por una sola capa celular.

 

Estratificada: Cuando hay màs de una capa celular.

 

Pseudoestratifocada: Todas las cèlulas se asientan en la membrana basal, pero no todas tienen la misma altura.

 

Trancisiòn: Presente ùnicamente en el aparato urinario.

*En base a particularidades estructurales

 

CHAPA ESTRIADA: Presenta gran nùmero de microvellocidades en la parte apical y su forma, altura son regulares. Se observa de manera discontìnua.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

RIBETE EN CEPILLO: Numerosas microvellocidades en la parte apical, de altura irregular y apariencia accidentada.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ESTEREOCILIOS: Microvellocidades muy largas que se observan como cilios en la parte apical, de curso irregular. 

El tejido epitelial forma agregados con cantidades minimas de sustancia extracelular, pero para mantener la cohesion entre las mismas, lo puede hacer mediante:

 

 

INTERDIGITACIONES

 

Las caras laterales de las celulas estan muy proximas entre si, presentan bordes irregulares, que se engranan unas con otras, manteniendo la union.

 

 

CITOESQUELETO

 

El citoesqueleto de las celulas epiteliales esta muy desarrollado y se compone de:

 

*FILAMENTOS INTERMEDIOS

 *MICRROFILAMENTOS (contactiles por su contenido de actina) 

TIPOS DE UNIONES ENTRE CELULAS EPITELIALES

 

ZONA OCLUYENTE : Se cierra el espacio intercelular ya que las membranas de las celulas se unen. Puede ser a lo largo de una zona.

 

ZONA ADHERENTE: Uniones de celula-celula en forma de cinturon. Mediante moleculas de adhesion como lo son las cadherinas y proteinas como activina y vinculina. 

 

MACULA ADHERENTE (DESMOSOMA) : Uniones celula-celulaen forma de puntuaciones. Participan cadherinas y proteinas como la desmoplaquina, asi como filamentos intermedios.

 

UNION DE ESPACIO O TIPO GAP: subunidades proteicas hexagonales entre los espacios intercelulares. Son huecas y permiten el paso de iones y moleculas de bajo peso molecular 

 

COMPLEJOS DE UNION

Las glandulas son estructuras que pueden estar constituidas por una o varias células, y que se forman a partir de tejido epitelial. Tienen por función secretar diversas sustancias y se clasifican en 

 

ENDOCRINAS: No tienen un conducto excretor, y su producto se libera al torrente circulatorio. Estas glándulas producen hormonas que son vertidas directamente al torrente sanguíneo y transportadas por los vasos sanguíneos hasta los tejidos blanco o diana, donde llegan a ejercer su función.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 EXOCRINAS: Se conectan a la superfiecie del epitelio por un conducto excretor que transporta su producto de secrecion al exterior. Ejemplo: las células caliciformes productoras de mucosidad, presentes en epitelios como el que recubre el intestino, y las glándulas sudoríparas, sebáceas y mamarias.

Tejido glandular endocrino y exocrino

 

Dependiendo de cómo se forma la secreción también se pueden distinguir varios tipos:

 

1.- Merocrina : Pequeñas vesículas llenas de la sustancia se funden con la membrana (exocitosis). En este proceso, las células no pierden ninguna parte de la membrana celular y ningún o muy poco citoplasma. El sudor es un ejemplo de secreción merocrina.

 

 

2.- Holocrina: Toda la célula se dedica a la formación de la secreción, y se pierde. La secreción llena la célula y, finalmente, se descompone. Ejemplo: glándulas de sebo.

 

 

3.- Apocrina: Vesículas llenas de la sustancia se unen al citoplasma que rodea la membrana celular de las glándulas. En el proceso, las células pierden parte de la membrana celular y el citoplasma. Ejemplos: glándula de leche.

 

https://books.google.com.mx/books?id=-FX6oa48oTgC&pg=PA57&dq=glandula+endocrina+y+exocrina&hl=es-419&sa=X&ved=0ahUKEwj6wrartrHPAhUFSSYKHfMHDogQ6AEIIzAB#v=onepage&q=glandula%20endocrina%20y%20exocrina&f=false

Organizaciòn general de una glàndula ramificada

Clasificaciòn de glàndula exòcrina