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¿A que se refiere realizar una técnica histológica?  Pag.5

El análisis microscópico como método de trabajo. Pag.3

Análisis microscópico como método de trabajo

Este método depende del problema al que nos enfrentemos el que se comience por uno u otro.

Esta se refiere a la serie de pasos que conducen a la elaboración de laminillas o preparaciones histológicas.

 

Para realizar el estudio microscópico de los componentes de un organismo se recurre a varios procedimientos dependientes de la naturaleza del material y de las necesidades de dicho estudio:

 

  • Elaboración de cortes.
  • Frotis.
  • Células y tejidos en cultivos.
  •  Materiales disociados.
  • Micro incineración.
  • Coloraciones vitales.

 

La técnica histológica

 

 

 

Es un proceso que lleva a la obtención de cortes de órganos preparados adecuadamente para efectuar el estudio microscópico de sus componentes como son Tejidos y células.

¿Entonces que es una técnica

 

 

histológica?

¿Cuáles son los métodos de estudio en tejidos?

 

Existen diversas  técnicas histológicas que permitien la observación especifica de ciertos tejidos en dicho organo, tales como:

 

  • Técnicas topográficas: Permiten una visión general de los tejidos.
  • Técnicas especiales: Se aplican para demostrar algunos componentes particulares.
  • Técnicas histoquímicas: Por medio de reacciones químicas conocidas. Se colorean sustancias específicas.

 

Tipos de coloraciones

Entre las técnicas topográficas se conoce la técnica de Hematoxilina-Eosina, mostrando asi su procedimiento.

Técnica para desparafinar:

1. Xileno 5 cambios de 1 minuto cada uno.

2. Abs-xilol 5 cambios de 1 minuto cada uno.

3. Alcohol de 96° 3 cambios de 1 minuto cada uno.

4. Alcohol 70° 2 cambios de 1 minuto cada uno.

5. Lavar con agua de la llave.

 

Técnica de Hematoxilina-Eosina:

1. Coloración con Hematoxilina por 2 minutos

2. Lavar con agua de la llave.

3. Diferenciar rápidamente con alcohol-ácido.

4. Lavar con agua de la llave.

5. Virar en agua amoniacal.

6. Lavar con agua de la llave.

7. Coloracion con Eosina de 35 a 45 seg.

8. Lavar rápido con alchohol 96°.

9. Abs-xilol 3 cambios de 1 minuto  cada uno.

10. Xileno 3 cambios de 1 minuto cada uno.

11. Montar en resina sintética.

Introducción a la histológia animal

Histología es una palabra derivada del griego que significa "Estudio de tejidos". En la actualidad se le conoce como la disciplina científica que estudia la estructura microscópica de organismos. 

En el siglo XVIII el anatomista frances Bichat, fue el primero en utilizar el término tejido, para designar las capas y estructuras de texturas diversas en disecciones del cuerpo humano. Gracias a eso se le conoce como tejido a un grupo de celulas similares especializadas en la realizacion de funciones determinadas.

 Existen 4 tipos de tejidos y cada uno de ellos realiza una funcion importante

 

A) Tejido epitelial

B) Tejido conjuntivo

C) Tejido muscular

D) Tejido nervioso

 

 

La palabra epitelio se deriva de EPI-SOBRE y TELE-PAPILAO PEZON, lo que significa que es un tejido cuyas celulas se encuentran estrechamente unidas para la realización de diversas funciones:

  • Revestimiento
  • Protección
  • Absorción
  • Intercambio
  • Secreción
  • Sensitivas
  • Contractibilidad

Tipos de tejido.

La clasificación de estos epitelios es de naturaleza morfológica basándose en tres fundamentos importantes:

a)  Forma de las células

b) Número de capas celulares

c)   Particularidades estructurales

Clasificación del tejido epitelial.

El epitelio glandular está constituido por células especializadas en la secreción (modelo de célula secretora), las que pueden estar aisladas o agrupadas constituyendo las glándulas unicelulares o multicelulares respectivamente. Las glándulas unicelulares están constituidas por células secretoras aisladas, como ocurre con las células caliciformes que producen mucus y se encuentran dispersas en los epitelios de revestimiento de las vías digestivas y respiratorias. 

También existen células aisladas que segregan hormonas, situadas en diferentes órganos, como el tubo digestivo entre otros. Ambas se diferencian, además de por el tipo de sustancia que segregan por el lugar de las células en que lo realizan, mientras que las primeras lo realizan por el borde apical, las segundas lo hacen a nivel del borde basal hacia los vasos sanguíneos del tejido conjuntivo que las rodean. 

Las glándulas multicelulares están constituidas por grupos de células especializadas en la secreción. 

Tejidos glandulares

Pueden estar formando parte de diferentes órganos, como en las glándulas presentes en la pared de los tractos digestivos y respiratorios; o constituyendo verdaderos órganos independientes. Estos órganos independientes o glándulas, tienen una particular histogénesis, su desarrollo es a partir de los epitelios de cubierta o revestimiento que le dan origen.

El epitelio superficial se invagina y forma un cordón de células epiteliales que crece hacia el interior del tejido conjuntivo. En ocasiones este cordón celular mantiene el contacto con el epitelio de origen, diferenciándose en dos porciones: unidad secretora y conducto excretor, que constituyen el parénquima de las glándulas exocrinas; y en otros casos pierde el contacto con el epitelio superficial, por lo cual las glándulas endocrinas carecen de conducto excretor, diferenciándose su parénquima en cordones, acúmulos y folículos

 

 

 

Las glándulas exocrinas multicelulares pueden clasificarse a partir de las características morfológicas dadas por el número de conductos, la forma de su unidad secretora, la naturaleza de la secreción y el modo de segregar.

Glandulas exocrinas

POR EL NÚMERO DE CONDUCTOS

Estas se clasifican en simples, si presenta un conducto excretor único, que no se divide, y compuestas, cuando los conductos excretores se dividen. Las glándulas simples en que desembocan, más de una unidad secretora se denominan, además, ramificadas

POR LA NATURALEZA QUÍMICA DE LA SECRECIÓN

Desde el punto de vista químico, los productos segregados por las células exocrinas pueden ser de tipo mucoso, si el producto de secreción es viscoso, rico en mucopolisacáridos o mucoproteinas, como por ejemplo el secretado por las glándulas esofágicas; y seroso, si el producto de secreción es un líquido claro acuoso de contenido enzimático, como por ejemplo el de los acinos pancreáticos. Las células de secreción serosa y mucosa pueden distinguirse fácilmente entre sí, morfológica y tintorialmente, utilizando la técnica de coloración de H/E.

 

POR LA FORMA DE LA UNIDAD SECRETORA.

Glándulas tubulares. Se originan por una invaginación en forma de tubo. Existen en numerosos lugares del organismo, como en el aparato digestivo, por ejemplo las glándulas intestinales; otro tipo de estas son las glándulas sudoríparas en la que su porción terminal contorneada se enrolla sobre si misma. Glándulas alveolares. Este tipo de glándula se compone de dos partes, una porción proximal constituida por el conducto excretor, el cual puede ser simple o ramificado, y una porción distal en forma de esfera, constituida por la porción secretora. Este tipo de glándula es típico de las glándulas salivales y de la porción exocrina del páncreas. En esta última, a las unidades glandulares se les llama acinos. Glándulas túbulo-alveolares. Están formadas por unidades tubulares y alveolares.

Las glándulas endocrinas son un conjunto de glándulas que producen sustancias mensajeras llamadas hormonas, vertiéndolas sin conducto excretor, directamente a los capilares sanguíneos, para que realicen su función en órganos distantes del cuerpo (órganos blancos).

Principales glandulas que componen el sistema endocrino son: 

Glandulas endocrinas

Características morfológicas:

 

1.- Contiene diversos tipos de células y sustancias intercelulares muy abundantes.

 

2.- Tejido vascularizado.

 

Características funcionales:

 

Por lo antes referido, sus funciones son variadas:

 

1.-  Sostén y unión de otros tejidos

 

2.-  Transporte y almacenamiento de diversas sustancias

 

3.-  Defensa

 

4.-  Reparación tisular

 

5.- Secreción

 

Caracteristicas de origen

 

El tejido conjuntico deriva del mesenquima embrionario o primitivo. que es una zona diferenciada del mesodermo primitivo, formado por una trama de células estrelladas y una sustancia intercelular "indiferenciada"

 

Constituye un conjunto variado de tejidos con funciones de union y transporte. Ademas presenta diferentes caracteristicas importantes, tales como:

Tejido Conjuntivo

Representación esquemática del origen de las células del Tejido Conjuntivo a partir del mesénquima embrionario.

En el hombre se presenta un tejido conjuntivo cuyo volumen  de  5 Lts aproximadamente, representando el 7% de su peso corporal.

 

Este esta compuesto por elementos formes:

 

 

1.- Células (eritrocitos y leucocitos)

 

2.- Fragmentos celulares (plaquetas)

 

3.- Substancia intercelular (plasma)

 

 

 

a)    Estos elementos circulan en un sistema cerrado compuesto por un órgano propulsor (el corazón) y por los vasos sanguíneos.

 

 

b)    Distribuye y transporta diversas sustancias tales como agua, gases (Oxigeno  y CO2), nutrientes, hormonas, vitaminas y enzimas, etc.

 

 

c)    Contribuye a la regulación del pH corporal del equilibrio iónico e hídrico y de la temperatura.

 

 

d)    Finalmente Interviene en la homeostasis y defensa del organismo a través de mecanismos como la coagulación, transporte de células fagocíticas y el transporte de anticuerpos.

 

 

 

Tejido conjuntivo sanguineo

Elementos formes

Son células con forma de disco bicóncavo altamente diferenciadas, que en un momento de su evolución pierden organeros como el núcleo, el aparato de Golgi, los ribosomas  y el R.E.R; las mitocondrias y los centriolos.

 

Antes de que eso ocurra, sintetizan la hemoglobina, que les sirve como pigmento respiratorio.

 

Tienen un tamaño de 7.5 µm de diámetro y 2 µm de espesor.

Eritrocitos

Clasificacion de leucocitos

Leucocitos

Aspectos de leucocitos a nivel microscopico.

Sistema de defensa de leucocitos

Los leucocitos forman parte de un sistema de defensa contra agentes agresores sean biológicos, fisicos o químicos. 

 

 

 

 

Mecanismos a los que se incorporan con acciones particulares los leucocitos:

 

  1. Barreras naturales

La piel, las mucosas; digestivo, respiratoria, urinaria y la de las vías genitales; constituyen una barrera física que protege contra la invasión de microorganismos patógenos. La barrera puede reforzarse por la presencia de sustancias bactericidas como es el caso de la lisosima en la cavidad oral y en las lágrimas

 

  1. La fagocitosis

Es el  proceso para el cual los leucocitos localizan, identifican y destruyen o aíslan agentes patógenos. Estos pueden desplazase sobre  sustratos sólidos, reconociendo así al agente agresor y emitir pseudópodos que los engloban. Los leucocitos sanguíneos o tisulares más diferenciados en este sentido son los neutrófilos y los monocitos; sin embargo, incluso los linfocitos tiene la capacidad de fagocitar partículas pequeñas. Una vez formada la vacuola fagocitica, el material puede ser digerido gracias a las diversas enzimas lisosomales, o bien permanecer secuestrado en el interior del leucocito.

 

  1. El sistema inmune

Se conoce bajo este nombre a un conjunto de factores celulares y humorales, cuyas acciones protectoras se desencadenan ante células o productos biológicos específicos llamados antígenos.

Según los elementos que intervienen en las reacciones inmunes y según los productos a que dan lugar, se distinguen dos Sistemas Inmunes: Celular y Humoral.

 

 

 

En estas reacciones intervienen los linfocitos T actuando  directamente contra  organismos invasores destruyéndolos y  produciendo sustancias que amplían la respuesta defensiva.

 

 

  • Factor de transferencia (F.T.): es una substancia dializable con un peso molecular de 10,000; es capaz de amplificar la reacción inmunológica de defensa, al activar a linfocitos situados en otros lugares del organismo diferentes del sitio en que se tuvo el contacto con el antígeno. O bien al ser inyectado en un huésped que no ha tenido contacto con el antígeno, sensibilizar a sus linfocitos.
  • Linfotoxina (L.T.): Es una sustancia termoestable con un peso molecular de 90,000 capaz de destruir a un gran número de células o gérmenes. Este efecto citotóxico es irreversible y se debe fundamentalmente a la inhibición en la síntesis de R.N.A. a nivel de núcleo de la célula atacada.
  • Factor anti migración de los macrófagos (M.I.F): La producción de esta sustancia hace que los macrófagos  que están circulando “alertas” en el organismo se detenga en el lugar de ataque de los antígenos y se concentren en este sitio para reforzar la acción fagocitaria de los neutrófilos.

Sistema inmune celular 

  • Factor activador de los macrófagos (M.A.F): Este factor hace más agresivos a los macrófagos contra determinados antígenos. Por ejemplo, es bien conocido el hecho de que los macrófagos no logran destruir al bacilo tuberculoso durante su primer ataque, pero gracias a la instrucción que reciben del linfocito, ante su segundo ataque obran con mayor agresividad y lo logran destruir.
  • Interferón: factor que impide a los virus replicarse.
  • IgT: Es una inmunoglobulina especial que activa al linfocito B para producir anticuerpos. Por ser citofílica, es decir, por tener la capacidad de unirse a la superficie de los macrófagos hace que estos concentren los radicales inmunológicos obtenidos del antígeno y lo presente adecuadamente a los linfocitos B para estimularlos a una mayor producción de anticuerpos.
  • Otros factores: Parece ser que los linfocitos  T producen otros factores no suficientemente comprendidos aun y que tienen acción directa sobre neutrófilos, basófilos y eosinofilos atrayéndolos al sitio de agresión del Ag.

Ante la entrada de un antígeno, los linfocitos B se transforman en células plasmáticas quienes producen anticuerpos. Estas sustancias de naturaleza proteica neutralizan de manera específica a los antígenos que desencadenaron la reacción.

 

Los anticuerpos o inmunoglobulinas (Ig) pasan a la sangre y a la linfa y son distribuidas por todo el organismo.

 

Las inmunoglobulinas conocidas son las siguientes: IgA, IgD, IgE, IgG y IgM.

Sistema inmune humoral

Origen y desarrollo del sistema inmune

Los linfocitos, los monocitos y los macrófagos son las células implicadas directamente en las reacciones inmunitarias. 

 

Desarrollo de este:

  • A partir de células madres en medula ósea se diferencian los primeros linfocitos.
  • Unos emigran al timo y otros a la bolsa de Fabricio en las aves o bien hacia un órgano u órganos equivalentes en otros animales.
  • Los linfocitos T comienzan su maduración bajo la influencia directa de la porción epitelial del timo. Después pueden abandonar este órgano, circular y a la distancia, pero bajo sus influencia, completar su diferenciación manifestando sus características de citotoxicidad y de reproducción de diferentes factores.
  • Las células B probablemente maduren en la propia médula ósea en animales diferentes de las aves. Ahí adquieren la capacidad de sintetizar pequeñas cantidades de inmunoglobulinas del tipo M (IgM). Posteriormente habrá células que sintetizan IgG e IgA, y finalmente se diferencian a células plasmáticas las que sintetizan todos los tipos de inmunoglobulinas.

Origen y desarrollo del sistema inmune

La inflamación es un proceso o mecanismo de respuesta homeostática que:

  1. Ayuda a neutralizar y destruir agentes agresores.
  2. Evita que se diseminen y repara los daños tisulares ocasionados.
  3. Difiere en su desarrollo y resolución final, dependiendo de la causa e intensidad de la agresión.

Proceso inflamatorio

La reacción antígeno-anticuerpo es indispensable para la supervivencia del organismo debido a que es un mecanismo de defensa que lo protege; pero en circunstancias especiales suele originar problemas, tal es el caso de las alergias.

 

El antígeno (alérgeno) produce la reacción alérgica, pudiendo ser de un alimento (marsicos, quesos, etc.), o algún fármaco (penicilina), cosméticos, el polen o los microorganismos pueden ser alérgenos.

La alergia

Etapas de las alergias

Las plaquetas se observan en un frotis como grupos de pequeños cuerpos basófilos que miden 3 µm. Tienen una parte central más obscura (Centrómero) y una parte periférica (hialómero). En el centro se agrupan diferentes organelos e inclusiones como mitocondrias, siderosomas, ribosomas, glucógeno, gránulos con serotonina, enzimas y filamentos de trombostenina.

La hemostasia es un mecanismo que se desencadena cuando hay una hemorragia al romperse los vasos sanguíneos. El proceso hemostásico que se desencadena detiene la hemorragia, es instantáneo, localizado y por lo tanto no afecta la fluidez de la circulación

 

La hemostasia

Las plaquetas

La linfa es esencialmente un ultra filtrado de plasma sanguíneo por lo que si composición química es muy similar, contiene agua, electrolitos y cantidades variables de proteínas diversas, entre ellas anticuerpos.

 

 

A diferencia de la sangre solamente contiene linfocitos y monocitos, pero también a diferencia de ellas transporta células plasmáticas normalmente.

Linfa

  • La linfa circula en el Sistema Vascular Linfático, el sistema de drenaje en el cual los vasos más pequeños son conductos ciegos.
  • El punto de inicio de esta circulación son precisamente los capilares linfáticos que recogen el exceso de líquidos de los tejidos.
  • La linfa recién formada se enriquece con linfocitos y monocitos, así como, con células plasmáticas que pasan de los tejidos a la circulación.

Tejido conjuntivo propiamente dicho

En este tejido (T.C.P.D) Se agrupan varios tejidos que aunque de aspectos diferentes tienen como característica común el poseer una substancia intercelular de consistencia viscosa. Algunos de ellos unen a los diversos tejidos, órganos y sistemas; constituyen un soporte mecánico y facilitan la difusión y el almacenamiento de todo tipo de metabolitos

Existe una serie de tejidos que se diferencian estructuralmente entre sí por ciertas caracteristicas:

 

Los tipos celulares presentes

El tipo o la calidad de fibras que contienen

La proporción entre células, fibras y matriz amorfa

 

Dando como resultado la existencia de ciertas variedades:

 

 

a)    Tejido conjuntivo laxo

 

b)    Tejido mucoso o gelatinoso

 

c)    Tejido conjuntivo

  1. Regular
  2. Irregular

d)    Tejido reticular

 

e)    Tejido elástico

 

f)     Tejido adiposo

          • Blanco
          • Pardo

g)    Tejido mieloide

 

h)   Tejido linfoide

 

 

 

Sostienen estructuras normalmente sometidas a presión y pequeños traumatismos. Es el tejido conjuntivo más abundante, rellena espacios entre las fibras y haces musculares, sirve de apoyo a los epitelios y forma una capa en torno a los vasos sanguíneos y linfáticos. Apoyando y nutriendo las células epiteliales, el tejido laxo se encuentra en la piel, en las mucosas y en las glándulas.

 

Las células más abundantes son los fibroblastos y los macrófagos, pero están presentes todos los demás tipos descritos. Este tejido es de consistencia delgada, flexible y poco resistente a la tracción.

Tejido conjuntivo laxo

Tejido conjuntivo mucoso o gelatinoso

Lo que caracteriza a este tipo de tejido es la gran abundancia de matriz extracelular, con mucho ácido hialurónico. A pesar de ser claramente visibles, las fibras de colágeno ocupan proporcionalmente poco espacio.

 

Presenta células muy dispersas, fundamentalmente fibroblastos, que suelen contactar entre sí a través de sus prolongaciones celulares. Aunque es morfológicamente parecido al tejido mesenquimático, el tejido gelatinoso es un tejido diferenciado.

 

La gran cantidad de glicosaminoglicanos, como el ácido hialurónico, hace que sea un tejido abundantemente hidratado, y que es capaz de resistir presiones mecánicas.

 

Abunda en el periodo embrionario y es poco frecuente en adultos, también se encuentra en regiones concretas como la placa coriónica de la placenta y alrededor de los capilares fetales. Se encuentra también en la cresta de algunas aves.

En el tejido irregular las fibras de colágeno constituyen la mayor parte del volumen de este tejido. Los haces de fibras son relativamente toscos y están entretejidos en una malla compacta que deja muy poco espacio para que lo ocupen las células y la sustancia fundamental. Entre las fibras de colágeno se observa una trama de fibras elásticas esparcidas entre las mismas. Los fibroblastos se sitúan entre los haces de fibras de colágeno, pero en las preparaciones histológicas sólo es visible su núcleo alargado.

 

 

En el regular se dispone en forma de robustos cordones cilíndricos o láminas planas de fibras de colágeno toscas y estrechamente agrupadas que le dan un aspecto reluciente cuando se estudia en fresco. Sus fibras están orientadas en la dirección más adecuada para que el tejido pueda resistir las fuerzas mecánicas a las que se ve sometido. Los tendones, que trasmiten a los huesos la tensión de los músculos, son un ejemplo típico de tejido conjuntiva denso regular. Están constituidos por fibras de colágeno tipo I paralelas y estrechamente agrupadas, con muy poco espacio entre las mismas para la sustancia fundamenta

Tejido conjuntivo regular e irregular

Es muy delicado, forma una red tridimensional para sustentación de células. Está formado por fibras reticulares, en íntima asociación con las células reticulares.

 

Se encuentra en los órganos formadores de células de sangre (médula ósea hemopoyética y órganos linfáticos) constituyendo el armazón que sopota las células libres allí existentes(células hemopoyéticas), que dan origen a las células de la sangre.

 

Las células reticulares son, en realidad, fibroblastos especializados en la producción de fibras reticulares.

Tejido conjuntivo reticular

El tejido adiposo es un tejido conjuntivo especializado en el almacenamiento de lípidos. Se puede considerar como un tejido conectivo un tanto atípico puesto que posee muy poca matriz extracelular, pero su origen embrionario son las células mesenquimáticas derivadas del mesodermo,

Hay dos tipos de tejido adiposo: el formado por grasa blanca, cuyos adipocitos presentan una gran gota de lípidos, y el formado por grasa parda . El color, blanco (a veces amarillento) o pardo se refiere al color de la grasa en su estado fresco. El origen de los diferentes tipos de adipocitos quizá sea uno de sus aspectos menos conocidos. Aunque los dos tipos de grasa derivan de células mesenquimáticas, lo hacen a partir de poblaciones diferentes. De hecho, la grasa parda comparte progenitor con las células musculares, no así la blanca.

 

grasa tabla

Este tejido está formado por haces paralelos de fibras elásticas gruesas. El espacio entre esas fibras está ocupado por fibras colágenas finas y fibroblastos aplanados. Su riqueza en fibras elásticas confiere al tejido su color amarillo típico y gran elasticidad.Es poco frecuente, encontrándose en los ligamentos amarillos de la columna vertebral

Tejido conjuntivo Adiposo

Tejido conjuntivo elastico

Tejido conjuntivo mieloide y linfoide

Etejido hematopoyético es el responsable de la producción de células sanguíneas. Existe tejido hematopoyético en el bazo, en los ganglios linfáticos, en el timo y, fundamentalmente, en la médula ósea roja, el centro hematopoyético más importante del organismo.

 

En el momento de nacer, toda la médula ósea es roja. En los individuos adultos, la médula roja persiste en los intersticios de los huesos esponjosos. Se trata de un tejido blando, formado por fibras reticulares y una gran cantidad de células: adiposas, macrófagos, reticulares y precursoras de las células sanguíneas.

 

Las células madre hematopoyéticas tienen capacidad de división y de diferenciación. Algunas de las células procedentes de su división se diferencian en células que intervienen en la formación de los eritrocitosgranulocitos y monocitos

 

El tejido hematopoyético puede ser de dos tipos:

-Mieloide: es el que forma la médula ósea roja, que se encuentra entre las trabéculas del tejido óseo esponjoso. Formado por fibras reticulares y una gran cantidad de células madre precursoras de glóbulos rojos, leucocitos y plaquetas.

-Linfoide: en él se produce la diferenciación de los linfocitos. Lo encontramos en los ganglios, el timo, el bazo y las amígdalas.

Variedades del tejido propiamente dicho

La matriz amorfa ocupa los espacios entre las células y las fibras conjuntivas. 

 

La matriz amorfa es basófila, PAS (+) y metacromática. Estas reacciones son atribuibles a algunos de sus componentes químicos, los mucopolisacaridos o glicosaminglicanos.

Matriz amorfa

 

Técnica tricomica de Masson 

Esta tecnica es una modificación del método original de Mallory donde introduce el uso de una laca de hematoxilina ferrica como colorante nuclear, así como la posibilidad de utilizar más de dos colorantes ácidos, para la diferenciación de distintas células.

 

Pasos para realizar la técnica:

 

1.- Desparafinar e hidratar los cortes.

2.- Dejar en el mordente (liquido de Bouin) una noche a temperatura ambiente

3.- lavar en agua corriente hasta decoloración.

4.- Hematoxilina de Groat, 3 min.

5.- Lavar abundantemente con agua de la llave (10 a 20 min.) diferenciar con alcohol acido si es necesario

6.- Escarlata de Briebrich-fuscina acida 1 min.

7.- Lavar en agua destilada

8.- Diferenciar con la mezcla de Orange G- ácido fosfomolibdico o fosfotúngstico. El citoplasma debe tener un color rosa o naranja, las fibras colágenas en los mismos colores pero muy pálidas o inclusive incoloras.

9.- Lavar en abundante agua destilada

10.- Contrastar con azul de anilina, 30 seg.

11.- Lavar en agua de la llave y posteriormente agua destilada

12.- lavar con agua acética (ácido acético glacial al 1%)

13.- Deshidratar y transparentar

14.- Montar con resina sintética

Técnica tricomica de Gallego 

La mayoría de las técnicas de coloración para el tejido elástico son empíricas, se sabe, que las fibras elásticas, se tiñen con fuscina básica, en presencia de oxidantes, como las sales férricas o bien, utilizando soluciones acidas se colorean selectivamente con la orceina.

 

Pasos para realizar la técnica:

 

1.- Fijación en formaldehido al 10%, 24 horas.

2.- Cortes por parafina.

3.- Desparafinar

 

4.- Solución I, 20 min
Cloruro férrico al 29%  1.5 ml.
Ácido nítrico                  1.5 ml.
Formaldehido comercial   1.0 ml
Agua destilada              100 ml.

 

5.- Lavar con agua destilada.

6.- Teñir con Orceína ácida, 4 min.

7.- Lavar en agua destilada

8.- Diferenciar en alcohol-acido, rápido.

9.- Lavar en agua destilada

 

10.- Contrastar con Amarillo de metanillo, 1 min.
Amarillo de metanillo              0.25 g.
Ácido acético glacial              0.25 ml.
Agua destilada                       120 ml.

 

11.- Lavar rápidamente con R-OH 96°

12.- Deshidratar

13.- Montar en resina sintética